论文部分内容阅读
目的自主建立RTKN2.LDLR.APOB.APOC1、ARL15、HLA-DMA、NFKB2、 CRP、ACE、NOS3、ENPP1和IQSEC1基因15个单核苷酸多态性(SNP)位点的临床常规化分子诊断方法,并探讨15个SNP位点与兰州地区汉族人群类风湿关节炎(RA)和冠心病(CHD)易感及血清学指标的相关性。方法基于高分辨熔解技术(HRM)建立类风湿关节炎7个关联基因RTKN2. LDLR、APOB、APOC1、ARL15、HLA-DMA 和 NFKB2的8个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点(rs3125734 C>T.rs688 C>T.rs693 C>T. rs4420638 A>G.rs255758 A>C.rs1063478 C>T、rs397514331 -/A 和rs397514332C>T)和冠心病5个关联基因CRP、ACE、NOS3、ENPP1 和 IQSEC1 的7个SNP位点(rs1205 C>T.rs4305 A>G.rs4353 G>A.rs7830 A>C.rs12528076 C>T. rs939899 G>A 和 rs1108640 G>C)的聚合酶链式反应-高分辨熔解曲线(PCR-HR M)检测方法,应用于588例RA患者与200例健康对照和260例CHD患者与238例健康对照的临床标本的检测。以测序金标准验证其检测正确性和临床适用性。通过病例对照分析,筛选兰州地区汉族人群RA和CHD的易感SNP位点,并进行其血清学指标RF和抗CCP抗体的相关性分析。结果全部标本PCR-HRM扩增后均能基因分型,经直接测序金标准验证,其基因分型正确率达100%。(1)RA病例对照分析显示：① rs3125734 C>T和rs688C>T位点基因型和等位基因频率在RA组与对照组间的差异有统计学意义(x2=6.144,P=0.046；x2=5.793,P=0.016；x2=8.582,P=0.014:x2=5.409,P=0.020)；rs255758 A>C和rs1063478 C>T基因型频率在两组间的差异有统计学意义(x2=6.877,P=o.032；x2=6.893,P=0.032).②性别分层后仅rs3125734 C>T位点基因型和等位基因频率在男性组间差异有统计学意义(χ2=6.527,P=0.011；x2=5.899,P=0.015)；rs688 C>T和rs255758 A>C基因型和等位基因频率女性组间差异有统计学意义(x2=8.916,P=0.012；x2=7.180,P=0.007；x2=10.788,P=0:006； x2=4.235,P=0.039)。③按血清学分层后rs3125734 C>T等位基因频率在CCP阳性RA组与健康对照组间差异有统计学意义(χ2=4.708,P=0.030),其基因型频率和等位基因频率在RF阳性RA组与对照组间差异有统计学意义(χ2=7.246,P=0.027；x2=6.370,P=0.012)；rs4420638 A>G位点基因型频率在RF阴性RA组与对照组间差异有统计学意义(χ2=4.105,P=0.043)。④风险回归对各位点突变基因型拟合二元logistic回归分析发现在RA组与对照组rs3125734 C>T突变杂合基因型CT可增加RA的发病风险(χ2=4.011,P=0.045,OR=1.613),rs688C>T突变纯合基因型TT可降低RA的发病风险(x2=6.853,P=0.009,OR=0.273), rs255758 A>C突变杂合基因型AC可降低RA的发病风险(χ2=6.641,P=0.010,OR=0.640):在男性RA组和男性对照组rs1063478 C>T突变杂合基因型CT可增加RA的发病风险(x2=6.029,P=0.014,OR=3.204)；在女性RA组和女性对照组rs688 C>T和rs255758 A>C突变纯合基因型TT/AC可降低RA的发病风险(x2=5.704,P=0.017,OR=0.244；x2=9.410,P=0.002,OR=0.531)；在RF阳性RA组与对照组rs3125734 C>T突变杂合基因型CT可增加RA的发病风险(x2=4.110,P=0.043,OR=1.853)；在RF阴性RA组与对照组rs4420638 A>G突变杂合基因型AG可增加RA的发病风险(χ2=4.046,P=0.044,OR=1.799)。⑤RA病例组血脂水平分析显示：rs693 C>T和rs4420638 A>G位点与HDL-C水平之间存在统计学差异(x2=4.762,P=0.029,OR=3.385；x2-8.226,P=0.004,OR=5.416),通过对rs693 C>T和rs4420638 A>G位点的突变基因型和野生型的患者HDL-C水平进行均值方差分析,结果显示两组间均存在统计学差异(F=7.312,P=0.008:F=12.482,P=0.001).(2)CHD病例对照分析显示：①rs4353 G>A位点等位基因频率在CHD组与对照组间差异有统计学意义(x2=3.998,P=0.045,OR=1.297)。②rs7830 A>C位点基因型频率在两组间差异有统计学意义(x2=6.369,P=0.041,OR=0.790)。③rs12528076 C>T位点等位基因频率在两组间差异有统计学意义(x2=3.918,P=0.047,OR=1.335)。④CHD病例组血脂水平分析显示：rs1205 C>T位点与HDL-C和LDL-C水平有相关性(x2=7.371,P=0.007,OR=7.920；x2=5.892,P=0.015,OR=0.320),通过对rs1205C>T位点的突变基因型CT/TT和野生型CC的患者HDL-C和LDL-C水平进行均值方差分析,结果显示仅与HDL-C水平存在统计学差异(F=14.067,P=0.001)。结论自主建立的PCR-HRM分子诊断方法能够对15个SNP位点正确基因分型,达到临床常规化分子诊断目标。RTKN2、LDLR、APOC1、ARL15和HLA-DMA与兰州地区汉族人群RA易感相关,其中rs693 C>T和rs4420638 A>G联合HDL-C血清水平可预警RA发生；ACE、NOS3和ENPP1与兰州地区汉族人群CHD易感相关,其中rs1205 C>T联合HDL-C血清水平可预警CHD发生。