目的：正常细胞在致癌因素的刺激下经过一系列的转化过程，包括癌基因和抑癌基因改变的积累最终转化成肿瘤细胞。现已证明肿瘤细胞的增殖和进展与多种细胞周期调控因子的异常密切相关。目前研究发现抑癌基因p27是细胞周期重要的负性调控因子。属于F-box蛋白的S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2，Skp2)特异作用于磷酸化的p27蛋白，通过泛素-蛋白酶体途径降解，导致p27蛋白表达迅速下降，由此引起的细胞周期调控异常与恶性肿瘤的发生发展相关。牙龈癌是常见的口腔颌面部恶性肿瘤，在口腔鳞癌的构成比中居第二或第三位，而且有较高的转移率及复发率。国内尚未见有关p27与Skp2蛋白和牙龈癌发生和发展相关性的报道。在本研究中，我们通过免疫组化的方法检测p27与Skp2蛋白在牙龈癌中的表达，旨在探讨p27、Skp2蛋白在牙龈癌发生发展中的作用。 方法：选取存档的46例牙龈癌和22例正常牙龈组织蜡块，分为试验组和对照组。将每个蜡块切为4-5μm的切片，共切4张，1张皿染色，1张作为阴性对照，其余2张分别行p27与Skp2染色。方法如下：石蜡切片常规脱蜡至水；5％H<,2>O<,2>甲醇振洗25分钟，以封闭内源性过氧化物酶活性；微波抗原修复，92-98℃×15分钟，室温冷却；正常山羊血清封闭，37℃孵育30分钟；倾去血清，滴加一抗，4℃过夜；滴加生物素化二抗，37℃孵育25分钟；滴加辣根酶标记的链酶卵白素，37℃孵育20分钟；最后DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。除血清封闭步骤外，以上各步后均以PBS振洗5分钟×3次。用已知p27、Skp2阳性的乳腺癌标本作为阳性对照；以。PBS代替一抗作为阴性对照。以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者为阳性，p27和Skp2阳性细胞为棕黄色颗粒位于细胞核或胞核伴胞质内，而仅胞质内着色为非特异性染色。所有切片采用双盲法由两位病理科医生独立评估。随机在400倍光镜下观察至少10个视野，在每个视野内计数100个细胞，取其平均值为该病例的细胞阳性率。其细胞阳性数>50％为高表达，<50％为低表达。 采用Man-Whitney检验p27和Skp2蛋白在牙龈癌与正常黏膜组织中的表达差异；Spearman等级相关分析p27、Skp2蛋白的表达与临床病理资料之间的相互关系以及p27和Skp2表达之间的相关性。所有资料均在SPSS 12.0软件下操作。P<0.05为统计学差异有显著性。 结果：1.p27蛋白在牙龈癌细胞胞核或胞核伴胞质内染色阳性，而在正常黏膜组织中的染色阳性明显增强，Skp2蛋白在牙龈癌细胞核部位染色阳性，低分化的癌细胞常出现Skp2蛋白染色强阳性，而在正常黏膜组织中的基底细胞偶尔可见胞核Skp2阳性。在牙龈癌中p27蛋白的阳性率(63.04％)显著低于正常黏膜组织(90.91％)(x <2>=5.74，P<0.05)。Skp2蛋白在牙龈癌中的阳性率(32.61％)显著高于正常黏膜组织(4.55％)(x <2>=6.5 1，P<0.05)。 2.p27蛋白阳性表达率与肿瘤的病理分级呈负相关(P<0.05)，而Skp2蛋白阳性表达率则与以上临床病理特征呈正相关(P<0.05)；二者的阳性表达率与牙龈癌患者的年龄、性别无统计学上的显著相关性(P>0.05)。 3.Spearman等级相关分析表明，在牙龈癌组织中，p27和Skp2蛋白表达之间呈负相关(P<0.05)。 结论：1.在正常口腔黏膜组织和牙龈癌组织中，均有p27与Skp2的表达。但在牙龈癌中p27蛋白的表达明显降低，而Skp2蛋白在牙龈癌中的阳性率显著高于正常黏膜组织。表明p27与Skp2在牙龈癌的发生发展中发挥一定的作用。 2.在牙龈癌组织中，p27与Skp2的阳性表达率与患者的年龄、性别无关，但与肿瘤的病理分级有相关性。而且p27和Skp2蛋白表达之间呈负相关。