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目的:通过病例对照研究分析NRF2启动子区域-617C/A多态性,探讨NRF2启动子区域单核苷酸多态性与脓毒症易感性及预后的相关性。
方法:
1.收集2010.10月-2012.10月间入住温州医学院附属第一医院EICU的171例脓毒症患者和203例正常者。按2001年国际脓毒症定义会议关于脓毒症诊断新标准,将脓毒症分为一般脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组。按预后分将脓毒症分为死亡组及生存组。除外标准包括:孕妇及年龄小于18岁、慢性脏器功能衰竭、肿瘤消耗性体质、免疫缺陷、近期(半个月内)有输血史、骨髓移植、急性中毒等患者。
2.收集患者的详细临床资料,包括:年龄、性别、既往病史、就诊时间、用药时间、APACHII评分、血常规、肝功能、出凝血、CRP及影像学等资料。
3.以2%乙二胺四乙酸二钠(EDTA)管收集脓毒症患者及正常组者全血,使用TIANamp基因组DNA提取试剂盒提取样本基因组DNA。根据NCBI/GeneBank网站获得NRF2启动子序列。采用Premier5.0引物设计软件设计PCR引物,进行PCR扩增,对PCR产物进行DNA测序,采用基因测序法检测NRF2基因启动子-617位点上的基因序列。
4.计量资料采用(X±S)表示,计数资料用百分数表示,组间差异采用x2检验。用非条件logistic回归模型分析NRF2基因启动子-617位点多态性与脓毒症严重程度的关联性。检验水准为P<0.05认为有统计学意义,所有检验均是双侧标准,使用SPSS19.0进行统计学分析。
结果:
1、NRF2基因启动子区域-617位点存在CC、CA、AA3种基因型。203名对照组中等位基因C、A的频率分别为73.6%、26.4%,CC、CA、AA基因型分别为53.6%、40%、6.4%。171例脓毒症病人等位基因C、A的频率为66.4%、33.6%,CC、CA、AA基因型分别为42.1%、48.5%、9.4%。CC、CA、AA基因型分布无统计学意义,CC与(CA+AA)基因型分布有显著统计学差异,脓毒症患者与正常对照组等位基因C、A频率的差异具有统计学意义。
2、基因型CC、CA、AA及等位基因C、A在一般脓毒症、严重脓毒症组中无统计学意义。基因型CC与(CA+AA)两者分布在一般脓毒症、严重脓毒症组中有统计学差异。
3、基因型CC、CA、AA及等位基因C、A在休克、非休克组中无统计学意义。基因型CC与(CA+AA)两者分布在休克与非休克组中有统计学差异。
4、基因型CC、CA、AA以及CC、(CA+AA)及等位基因C、A分布频率在死亡组和生存组无明显统计学差异。
5、经校正年龄、性别、慢性病史、APACHEⅡ评分、脓毒症病因、临床相关指标等因素后,非条件logistic回归显示与无突变等位基因相比,脓毒症患者携带有突变等位基因者发生严重脓毒症的风险较高[OR=2.169,95%CI(1.024-4.594),P=0.043][OR=2.023,95%CI(1.018-4.017),P=0.044]。
结论:NRF2-617C/A基因多态性与脓毒症的发病有一定的关联性,与脓毒症的严重程度有一定相关性,而与脓毒症的预后无相关性。