污泥堆肥过程中多环麝香的降解与微生物群落演替的关系

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多环麝香(PCMs),尤以佳乐麝香(galaxolide abbalide, HHCB)和吐纳麝香(tonalide, AHTN)为主,这些化合物随着人们的日常生活,如洗涤、沐浴等首先进入生活污水中,随后大部分的多环麝香被吸附在活性污泥上,并随着污泥的处置而进入环境中。目前,环境科研工作者已分别在水体和沉积物、海洋和淡水生物群及人体的脂肪组织、血液和母乳中检出PCMs。以往常见的是对环境中PCMs的提取和测定方法的研究,对被微生物降解的研究比较少。本论文基于16SrDNA的变性梯度凝胶电泳技术(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis, PCR-DGGE)的分子微生物学方法研究了活性污泥堆肥中微生物群落结构的多样性,并分析了微生物群落结构演替与堆体中PCMs降解之间的关系。主要内容如下:1.在查阅大量相关文献的基础上,本论文通过三组对河流底泥的小型实验室全真模拟堆肥,构建了比较适宜微生物繁殖增长的外部条件,利用V(秸秆混合物):V(污泥)=2:1比例混合,初始水分控制在55%~60%, PH=6.7, C/N=30.59,添加一定量的菌剂时进行堆肥能正常发酵。采用时间-温度通风控制堆肥的方式,堆置天数基本能控制在15天,在堆置过程中,每天定时记录堆体的温度且定时采样,收集约15g,在常温下晾干后测麝香的浓度;收集约1g于-20℃C冰箱冷冻,用来提取微生物总DNA,进行PCR-DGGE。15天后堆肥达到腐熟,整个堆体经历了完整的常规发酵过程。2.将常温晾干后的污泥样品磨细,过60目筛子,采用微波辅助提取方法提取,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)来分析检测污泥中HHCB和AHTN的浓度。3.采用E.Z.N.ATM Soil DNA Kit试剂盒,将冷冻的污泥样品提取微生物总DNA,通过PCR-DGGE电泳图谱技术,运用Quantity one软件对图谱进行分析研究微生物群落内部变化,借助各种分析手段和教学方法研究各个微生物群体在复杂的外源影响下的演替过程,了解堆肥进程中微生物群落的演替规律,从而获取堆肥微生物体系的生态状况与特点,对堆肥进程等一系列工作的开展提供理论依据与参考。利用PCR-DGGE分子生物学方法研究了在堆肥发酵过程中微生物群落结构动态及其变化规律,并分析了微生物群落结构演替与HHCB和AHTN的降解之间的关系,从而进一步了解底泥高温发酵的作用机制,旨在寻找能够降解多环麝香的微生物种群,对于研究堆体中多环麝香的生化反应机理、污染物降解和转换途径有非常重要的意义。
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