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膀胱癌是中国人群泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其中95％的肿瘤起源于尿路上皮，到目前为止膀胱癌的具体发病机制尚未彻底明确。膀胱癌发病率有逐年增高的趋势，目前，膀胱癌的治疗仍然以手术为主，但术后复发率很高，而且晚期膀胱癌常发生局部浸润和远处转移，对晚期患者的治疗效果较差。为了寻找到更为有效的治疗方法，我们急需进一步阐明膀胱癌发病的分子机制，探索膀胱癌新的治疗靶点。 MicroRNA(miRNA)是近年来发现的一类由大小约20-24个核苷酸组成的单链非编码RNA，广泛存在于真核生物中，miRNA在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，表明其在发育和分化的过程中起重要的调控作用。miRNA通过与其靶mRNA的3UTR碱基不完全互补配对，进而抑制mRNA翻译或直接使其降解，使基因在转录后水平产生沉默，调控基因表达。研究发现，50％以上的miRNA基因定位于与肿瘤相关的区域，而且多种肿瘤中均存在miRNA异常表达，提示这类小核酸分子可能发挥着类似癌基因或抑癌基因的作用，参与了人类肿瘤的发生和发展。综合文献报道的芯片筛查结果，发现miR-133b在膀胱癌组织中呈明显低表达，miR-133b最早被认为是一种肌肉特异性的microRNA，发现它可以通过调节某种靶基因而参与心肌细胞的形成和心肌离子通道的表达。后来一些研究发现miR-133b在许多人类恶性肿瘤中呈低表达，如结直肠癌、肺癌、食道癌、前列腺癌等，但其在膀胱癌中的具体作用目前尚不十分清楚。 Bcl-w（亦称为BCL2L2）是Bcl-2家族成员之一，其编码的蛋白分子量为22kDa。Bcl-2基因家族有着重要的调控细胞凋亡作用，该家族包括抑制凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w等）和促进细胞凋亡蛋白（如Bax、Bad等）[9]，他们之间形成同源或异源二聚体，从而发挥不同的作用，一旦促凋亡蛋白和抑制凋亡蛋白之间的平衡被打破，不仅影响已有DNA损伤或周期异常细胞的凋亡，甚至影响肿瘤细胞的凋亡。Bcl-w在某些上皮起源的恶性肿瘤细胞株中呈高表达，如结肠癌、宫颈癌、乳腺癌等。但Bcl-w在膀胱癌中的表达及作用目前还很少有报道。 结合文献报道和生物信息学预测结果，我们推测Bcl-w可能是miR-133b调控的靶基因。本研究目的是明确miR-133b及Bcl-w在膀胱癌组织中的表达及其意义，并分析两者之间的相关性。同时在细胞水平，通过转染miR-133b模拟物和抑制物，进一步明确miR-133b对膀胱癌细胞内源性Bcl-w的影响，及miR-133b对膀胱癌细胞生物学行为的影响，初步探索miR-133b在膀胱癌中的作用及其可能的分子机制。 材料与方法: 本研究采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(stem-loop real-time RT-PCR)法分别检测膀胱尿路上皮癌组织和癌旁正常组织中miR-133b的表达丰度，分析miR-133b在不同组织中的表达差异及其与膀胱尿路上皮癌临床病理因素间的关系，探讨miR-133b在膀胱癌发生与进展中的重要作用。应用Western Blot方法检测Bel-w在膀胱癌组织与癌旁组织的表达，同时分析miR-133b与Bcl-w蛋白表达的相关性，初步探讨miR-133b在膀胱尿路上皮癌中的功能。 分别合成miR-133b的模拟物和抑制物并转染膀胱癌T24细胞，使膀胱癌细胞内的miR-133b表达量分别上调和下调，然后检测其对膀胱癌细胞内源性Bcl-wmRNA及蛋白表达的影响。通过CCK-8法和AnnexinⅤ-FITC双染流式细胞仪检测不同转染组膀胱癌细胞增殖和凋亡情况的变化，进一步明确miR-133b调控膀胱癌发生与进展的分子机制。 结果: 一、miR-133b及Bcl-w蛋白在膀胱癌中的表达 l、我们应用Real-time PCR方法检测41例膀胱癌及配对癌旁组织miR-133b的相对表达量，结果显示miR-133b在膀胱癌组织中的表达量较癌旁组织明显降低(P＜0.001)，癌旁组织中的表达量是膀胱癌组织中的3.02倍。同时发现miR-133b的表达量与肿瘤病理级别存在显著相关性(P＜0.01)，即肿瘤恶性程度越高（高级别组）miR-133b的表达量越低，提示miR-133b可能与膀胱癌的进展有关。 2、应用Western Blot方法检测膀胱癌及癌旁组织中的Bcl-w蛋白表达，结果显示Bcl-w蛋白在膀胱癌组织中呈明显高表达(P＜0.05)，散点图示miR-133b的相对表达量与Bcl-w的相对表达量存在线性相关趋势。Spearman相关分析结果r=-0.582（P＜0.01），差异具有统计学意义，结果显示在膀胱组织中miR-133b表达与Bcl-w表达呈显著地负相关关系 二、miR-133b对膀胱癌细胞内源性Bcl-w表达的影响 转染miR-133b模拟物或抑制物可显著增加或降低膀胱癌细胞内miR-133b的表达丰度，我们发现转染miR-133b模拟物可明显抑制膀胱癌细胞内Bcl-w蛋白表达（P＜0.05），相反转染miR-133b抑制剂可明显增加Bcl-w蛋白表达(P＜0.05)。但转染miR-133b模拟物和抑制物对细胞内Bcl-w的mRNA水平无明显改变。 三、miR-133b对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响 通过CCK-8检测发现转染miR-133b模拟物可显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖能力（P＜0.05），而转染miR-133b抑制物可明显提高膀胱癌细胞的增殖能力(P＜0.05)。AnnexinⅤ-FITC双染流式细胞仪检测结果显示转染miR-133b模拟物可促进T24细胞凋亡，凋亡率由阴性对照组的4.21％增加到16.47％（P＜0.05）;转染miR-133b抑制剂可抑制T24细胞凋亡，凋亡率由阴性对照组的6.36％降低到1.25％(P＜0.05)。 结论: 1、miR-133b在膀胱癌组织中较癌旁组织呈明显低表达，且与肿瘤病理分级有显著地相关性。 2、Bcl-w蛋白在膀胱组织中较癌旁组织呈明显高表达。在膀胱癌组织中miR-133b表达与Bcl-w蛋白表达呈显著负相关关系。 3、miR-133b可负向调节膀胱癌T24细胞内源性Bcl-w蛋白表达，但不影响Bcl-w mRNA表达。miR-133b可以抑制膀胱癌细胞增殖，同时促进细胞凋亡。miR-133b可能是通过调节Bcl-w基因表达进一步调控膀胱癌的发生与发展。