【摘 要】
：
目的通过对葡激酶(SAK)基因序列进行定点突变、表达、纯化与进行聚乙二醇修饰以获得较高纯度的聚乙二醇化葡激酶(peg-SAK-cys),并对其溶栓活性与免疫原性初步进行验证。方法
论文部分内容阅读
目的通过对葡激酶(SAK)基因序列进行定点突变、表达、纯化与进行聚乙二醇修饰以获得较高纯度的聚乙二醇化葡激酶(peg-SAK-cys),并对其溶栓活性与免疫原性初步进行验证。方法设计引物将根据SAK晶体结构与预测抗原位点所挑选的82号氨基酸突变为半胱氨酸并将突变质粒通过化学转化进入BL21(DE3)感受态。利用经典原核表达技术表达突变葡激酶蛋白(SAK-cys)。利用镍离子交换柱、分子筛等方法分离纯化SAK-cys蛋白并对其进行聚乙二醇修饰。用纤维蛋白平板溶圈法和血栓弹力图初步对本次实验制备的peg-SAK-cys与课题组以相同方法制备的另外4种peg-SAK-cys的生物活性进行验证。以酶联免疫吸附(ELISA)法评价这些peg-SAK-cys的免疫原性。分析体外实验数据,并对功能评价较高的peg-SAK-cys通过动物栓塞实验模型进一步功能验证。结果成功获得了82号氨基酸突变的葡激酶质粒,表达、纯化了突变蛋白,并进行聚乙二醇修饰获得了第82号葡激酶突变的葡激酶蛋白(peg-SAK-C82A),分离纯化后纯度在总蛋白质量的90%以上。统计分析与计算溶圈实验结果,第97号与104号氨基酸突变的聚乙二醇化葡激酶(peg-SAK-C97A、peg-SAK-C104G)保留了较高的活性;血栓弹力图实验数据也支持了这一结果;免疫原性测定结果提示peg-SAK-C104G的免疫原性显著低于野生型SAK(P=0.0002);评价peg-SAK-C104G对SD大鼠颈动脉栓塞模型的溶栓效果,显示蛋白于体内实验也保留了相当的溶栓能力。结论通过位点特异性特变与聚乙二醇修饰技术的联合运用可以成功改造出有较低免疫原性的活性葡激酶。
其他文献
现阶段在初中美术课堂的教学中,提高小组合作学习方法的路径已经逐渐成为教师教学的主要目标。因此,针对提高初中美术课堂小组合作学习效率的方法进行思考。
目前全国电动车保有量达2.5亿辆,但其中绝大多数为超标车,存在各种隐患。随着新国标发布的日益临近,电动自行车行业必将进行一场变革。从锂电化、小型化、智能化等方面分析了
<正>在2014年突破了100家店铺之后,迪卡侬将2015年的目标定在了150家。现在它信心十足地宣称,随着发展模式的不断进步,希望2015年能够冲刺到180家。根据官方数据,迪卡侬目前
在分析国内外点火线圈结构的基础上,结合研发设计的经验及新工艺、新设备的应用,提出了电感储能式干式点火线圈结构设计的基本原则及应用举例,从结构设计的层面上,保证点火线
《普通高中数学课程标准(实验)》的出版是高中数学应用与建模教学发展的重要里程碑,标志着高中数学教育正式走向基础性与实用性结合的现代路线。根据新标准和高中数学教学整
核心提示$$ 今年4月，由花城出版社推出的“后花园诗丛”精选诗人马永波、远人的作品，分别出版了诗集《词语中的旅行》、《你交给我一个远方》。出版社利用互联网“众筹”模
高性能低介电材料近年来在微电子封装、高频线路板、雷达透波等领域获得广泛关注。苯并环丁烯类低介电树脂是一类综合性能优异的-树脂材料,硅杂环丁烷是一类可开环聚合的单元
地方决策作为政策执行中的一个重要方面,直接关系到政策的有效执行和政策目标的实现。因此,研究地方决策中存在的问题和影响因素,改善政策执行中的地方决策,对政策目标的有效
针对光电系统中常用的振动扫描反射镜进行了结构设计技术研究。采用碳化硅材料,设计了反射镜的支撑方式,确定了反射镜轻量化孔的形式。使用ANSYS软件对反射镜分别进行了静态
3月6日，习近平总书记在决战决胜脱贫攻坚座谈会上发表了重要讲话，对高质量完成脱贫攻坚目标任务和加强党对脱贫攻坚的领导提出了明确的要求，坚定了全国人民打赢疫情防控和脱贫攻