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目的：观察NE作用下心肌细胞凋亡率、SP、CGRP及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、αB晶体蛋白(CryAB)的变化,从凋亡相关蛋白的角度探讨SP、CGRP对NE诱导的心肌细胞凋亡的影响及机制。方法：1新生大鼠心肌细胞的体外培养及鉴定。选用出生1-3d的SD大鼠建立新生大鼠心肌细胞体外培养模型,采用免疫细胞化学(IC)染色的方法对心肌细胞进行鉴定。2观察不同浓度及同一浓度作用不同时点下NE诱导的心肌细胞凋亡率的变化。(1)取30孔培养72h的心肌细胞随机分为对照组(不加干预药物)与10-5mol/LNE作用15min、30min、1h、3h组,每组n=6。在NE作用不同时点后采用FCM与TUNEL两种方法测定心肌细胞凋亡率的变化(每种方法每组3孔)。(2)取18孔培养72h的心肌细胞随机分为对照组(不加任何干预药物)与不同浓度NE组(NE终浓度分别为10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L),每组n=3。药物干预3h后采用流式细胞术(FCM)测定心肌细胞凋亡率的变化。3不同浓度NE对凋亡相关蛋白的影响。取18孔培养72h的心肌细胞随机分为对照组(不加任何干预药物)与不同浓度NE组(NE终浓度分别为10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L),每组n=3。药物作用3h后采用Western blot的方法检测CryAB及凋亡相关因子Bcl-2、Bax及其比值的变化。4观察不同浓度NE对体外培养的心肌细胞SP、CGRP含量的影响。取18孔培养72h的心肌细胞随机分为对照组(不加任何干预药物)与不同浓度NE组(NE终浓度分别为10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L),每组n=3。药物作用3h后采用ELISA法测定各组细胞上清与蛋白中SP、CGRP的含量。5SP对NE诱导的凋亡率及相关凋亡蛋白的干预作用。将培养72h的心肌细胞随机分为对照组(不加任何干预药物)、NE组、SP+NE组、D-SP(SP的受体拮抗剂)+SP+NE组。以上各组中,NE、SP、D-SP终浓度分别为10-5mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L。每组n=3。药物作用3h后采用FCM测定凋亡率,采用Western blot的方法检测CryAB及Bcl-2、Bax及其比值的变化,采用实时荧光定量PCR的方法检测CryABmRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA及其比值的变化。6CGRP对NE诱导的凋亡率及相关凋亡蛋白的干预作用。将培养72h的心肌细胞随机分为对照组(不加任何干预药物)、NE组、CGRP+NE组、CGRP8-37(CGRP的受体拮抗剂)+CGRP+NE组。以上各组中,NE、CGRP、CGRP8-37终浓度分别为10-5mol/L、10-8Vol/L、10-7mol/L。每组n=3。药物作用3h后采用FCM测定心肌细胞凋亡率的变化,采用Western blot的方法检测CryAB及Bcl-2、Bax及其比值的变化,采用实时荧光定量PCR的方法检测CryABmRNA、Bcl-2mRNA, BaxmRNA及其比值的变化。结果：1成功建立体外培养的新生大鼠心肌细胞培养模型。2(1)10-5mol/LNE作用不同时点(15min、30min、1h、3h)后心肌细胞凋亡率均升高(与对照组比较,均P<0.05),但以3h凋亡率最多。(2)不同浓度NE(10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L作用3h,均能诱导体外培养的新生大鼠心肌细胞凋亡率的上升(与对照组比较,均P<0.05),但以10-5mol/L作用下测得的凋亡率最高。3与对照组比较,不同浓度NE作用3h后,CryAB表达下降(均P<0.05), Bcl-2表达下降(除10-8mol/L外均P<0.05)、Bax表达上升(除10-7mol/L外均P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05)。4与对照组比较,不同浓度NE作用3h后,上清与心肌细胞蛋白中SP含量均下降；上清中CGRP含量均无显著变化(均P>0.05),心肌细胞蛋白中10-5、10-4mol/LNE作用下CGRP含量上升(P<0.05)。5与对照组比较,NE组凋亡率升高, CryAB、Bcl-2蛋白表达与mRNA均下降,Bax蛋白表达与mRNA均上升,Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05)。与NE组比较,SP+NE组凋亡率下降,CryAB、Bcl-2蛋白表达与mRNA升高,Bcl-2/Bax比值升高(均P<0.05),BaxmRNA下降而蛋白表达无显著改变。与SP+NE组比较,D-SP+SP+NE组凋亡率升高,CryAB、Bcl-2蛋白表达与mRNA均下降,Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05)、BaxmRNA升高但蛋白表达无变化(P>0.05)。6与对照组比较,NE组各项指标变化同前所述。与NE组比较,CGRP+NE组凋亡率下降,CryAB、Bcl-2蛋白表达与mRNA升高,Bcl-2/Bax比值升高(均P<0.05),Bax蛋白表达与mRNA无显著改变(均P>0.05)。与CGRP+NE组比较,CGRP8-37+CGRP+NE组凋亡率升高,CryAB、Bcl-2蛋白表达与mRNA下降、Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05), Bax蛋白表达与mRNA无显著改变(均P>0.05)。结论：1NE可以诱导体外培养的心肌细胞的凋亡率增加,CryAB、Bcl-2表达下降而Bax表达升高,Bcl-2/Bax比值下降。2NE可以诱导体外培养的心肌细胞的SP、CGRP含量改变。3SP与CGRP均可以抑制NE所引起的凋亡率的变化,其机制可能是与各自的特异性受体结合后改变凋亡相关蛋白的比例有关。