多苯并咪唑钴配合物--DNA凝聚体细胞摄取途径的研究

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基因治疗是一种利用载体将健康基因导入细胞替换致病基因的方法。基因治疗技术中常用的载体包括病毒型载体和非病毒型载体,因为非病毒型基因递送载体有相对安全和使用简便两个显著性特点,所以非病毒型基因载体应用更为广泛。研究发现,非病毒型基因载体主要通过胞饮作用进入细胞,载体的尺寸、形状、表面电荷等理化性质对其进入细胞的途径都有影响;此外,对于同一载体,针对不同的细胞系,其进入细胞的途径也不相同。通过研究载体和细胞间的相互作用了解其摄取机制,对于提高转运效率会有很大的帮助。金属配合物作为非病毒型载体中的一类,近年来也越来越受到关注。本论文主要以金属钻配合物[Co(NTB)Cl]+凝聚DNA形成的凝聚体为研究对象,采用抑制剂法研究了该凝聚体依据哪些内吞途径进入COS-7细胞。在研究细胞摄取途径前,我们先通过琼脂糖凝胶电泳和紫外-可见分光光度计法对所提取的质粒DNA进行了检测。检测结果表明,提取的质粒DNA纯度和浓度都比较高,大部分DNA以超螺旋结构形式存在。在细胞实验方面,我们首先通过MTT法对实验中的抑制剂进行了细胞毒性研究。研究结果表明,无论是单独的抑制剂,还是抑制剂和配合物或凝聚体,细胞毒性都不大。其次通过荧光素酶表达法对凝聚体的细胞摄取途径进行了研究。研究结果表明,凝聚体进入COS-7细胞主要依赖于小窝蛋白调节的途径和大胞饮途径;加入NLS,NLS对凝聚体的细胞摄取途径没有影响,凝聚体进入COS-7细胞仍依赖于小窝蛋白调节的途径和大胞饮途径。最后,我们对凝聚体在HepG2细胞内的转染情况进行了研究,并和COS-7细胞内的转染效率作了比较。研究结果表明,凝聚体在HepG2细胞内有一定的转染效率,且在配合物和DNA摩尔比为1:1时转染效率最高。但总体上,凝聚体在HepG2细胞内的转染效率比在COS-7细胞内的转染效率低。
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