第一部分静脉血栓栓塞症的相关危险因素临床研究1、研究目的:分析住院病人静脉血栓栓塞症的临床特征和相关危险因素。2、研究方法:回顾性分析2016年至2017年我院诊断静脉血栓栓塞症(VTE)住院患者的人口学特征、相关的遗传性及获得性危险因素。采用发色底物法测定抗凝血酶(AT)及蛋白C(PC)活性,采用凝固法测定蛋白S(PS)活性。部分患者行二代基因测序。应用SPSS软件、采用卡方检验进行比较分析,P<0.05认为有统计学意义。3、研究结果:共收集了198例诊断VTE的患者,中位年龄61(14~92)岁,男女比例约1.3:1。其中初发病例有175例,占88.4%;复发病例23例,占11.6%。发病年龄主要集中在61~70岁的年龄段,男性发病年龄高峰在51~60,中位年龄59岁;女性患者发病年龄高峰在61~70岁,中位年龄62岁。对男性及女性患者在年龄分布构成比方面进行统计,发现并无明显统计学差异。VTE发生部位以下肢DVT最常见,占68.7%,其中左下肢较右下肢多见,占下肢DVT58.1%,考虑与左髂总静脉的生理解剖特征有关。VTE的发生受多种因素影响,在本组病例中,主要获得性危险因素有年龄>70岁(35.4%)、制动/卧床(24.7%)、恶性肿瘤(21.2%)、手术/外伤(20.1%);同时具有2种及以上获得性危险因素占79.6%。有104例患者外周血行PC、PS、AT活性测定,排除肝脏疾病,结果AT缺乏12例(11.5%),PS缺乏11例(10.6%),PC缺乏8例(7.2%);在这些抗凝蛋白缺乏者中,有61.3%的患者同时伴有获得性危险因素。部分VTE患者检出同型半胱氨酸、抗心磷脂抗体(ACA)及抗β-GP1抗体明显升高,认为高同型半胱氨酸及抗磷脂抗体也是血栓形成危险因素。对于年龄较小(<40岁),反复出现血栓,无明显获得性危险因素3例患者,进行二代基因测序发现PS、AT基因突变导致活性下降。4、结论:住院病人VTE以下肢DVT最常见,发病年龄集中在61~70岁,主要的常见的遗传性危险因素有先天性PC、PS、AT的缺乏,较常见的获得性危险因素有年龄>70岁、手术外伤、恶性肿瘤等;另外高同型半胱氨酸及抗磷脂抗体也是VTE发生的危险因素。VTE的发生是多种因素作用的结果,同时有多种危险因素并存时,VTE发生的风险增加。探索VTE患者血栓形成相关危险因素有助于为临床抗凝治疗的应用提供重要依据。第二部分遗传性抗凝血酶缺乏导致静脉血栓形成的分子研究机制抗凝血酶(antithrombin,AT)是人体内最重要的抗凝物质之一,是由肝细胞分泌的一种相对分子量约58.2k D的糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶抑制物(serine proteinase inhibitor,SERPIN)超家族成员。通过抑制凝血酶及活化的凝血因子IX、X、XI及XII丝氨酸蛋白酶的活性维持机体出凝血平衡,其作用约占抗凝系统总活性的70%。长期以来的基础与临床研究已证实AT缺乏是易栓症遗传性危险因素之一,在亚裔人群中尤为突出,当某些抗凝蛋白发生数量或质量缺陷易引发血栓形成。遗传性抗凝血酶缺乏症由AT基因突变引起,呈常染色体显性遗传规律,大多伴有家族史,先证者通常以不能解释的双下肢深静脉血栓形成或肺栓塞为主要表现。遗传性抗凝血酶缺乏患者在临床表现个体差异性大,本组中2例先证者分别以反复出现的下肢静脉血栓及不明原因的颅脑静脉窦血栓为就诊的主要原因,家系B中先证者与其父亲实验室检查结果一致(采用发色底物法分别检测AT:A及其他抗凝指标),但先证者表现为颅脑静脉窦血栓,而其父亲既往有下肢血栓病史。采用PCR法和核酸测序方法对先证者及其家族中其他成员抗凝血酶基因的7个外显子及其两翼内含子序列进行扩增、测序分析,结果发现1例是由点突变而导致的错义突变,另1例是缺失10个碱基引起读码框移突变,最终导致终止密码子出现,分别为Y198N、R229X,二者均为国际首次报道。虽未行抗原检查,但可确定先证者a点突变为II型突变,而先证者b碱基缺失引起框移突变为I型突变可能性极大。通过临床表现、家系分析、基因测序证实2例遗传性抗凝血酶缺乏症患者的基因突变而导致血浆中抗凝血酶含量或活性降低,是导致静脉血栓栓塞症的分子机制。AT突变的分子特点可为研究抗凝血酶蛋白结构与功能关系提供重要的信息。