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目的研究抗菌剂联合PDT(Photodynamic Therapy,光动力疗法)对钛片表面Pg(Porphyromaonas gingivalis,牙龈卟啉单胞菌)生物膜和Sa(Staphylococcus aureus,金黄色葡萄球菌)生物膜的灭菌效果。方法(1)制备polished(光滑)和SLA(Sandblasted Large-grit Acid-etched,大颗粒喷砂酸蚀)两种不同钛片,检测两种钛片的表面理化性质:粗糙度和表面自由能。(2)将Pg和Sa配制成浓度1×108 CFU/mL的细菌悬液,分别接种于两组钛片表面,Pg组厌氧培养72 h、Sa组厌氧培养48 h,菌落计数法计数两组钛片表面不同细菌的黏附量。(3)于polished钛片和SLA钛片(n=24)上培养Pg生物膜72h,并设PBS(Phosphate Buffered Saline,磷酸盐缓冲液)、0.2%CHX(ChlorhexidineDig luconate,氯己定)组、PDT组和CHX+PDT四个实验处理组,每组6个样本。各组分别处理1 min后涂板计数,比较不同消毒方法对钛片Pg生物膜灭菌效果;SEM(Scanning Electron Micrograph,扫描电镜)观察两组钛片表面Pg数量和结构;CLSM(Confocal Laser Scanning Microscope,激光共聚焦显微镜)观察钛片表面Pg活死菌分布和生物膜结构变化。(4)于polished钛片(n=36)和SLA钛片(n=36)上培养Sa生物膜48h,并设PBS组、CHX组、3%H2O2(Hydrogen Peroxide,过氧化氢)组、PDT组、CHX+PDT组和H2O2+PDT组六个实验组。各组分别处理1 min后涂板计数,比较不同消毒方法对Sa生物膜灭菌效果;SEM观察两组钛片表面Sa数量和结构;CLSM观察钛片表面Sa活死菌分布和生物膜结构变化。结果(1)SLA组钛片各组粗糙度参数均显著高于polished组,SLA钛片和polished钛片表面自由能分别为31.57±4.08mJ/m2和42.35±2.60 mJ/m2,两组具有统计学差异。(2)Pg在polished钛片和SLA钛片72 h的活菌黏附量分别为6.87±0.30×107CFU/mL和7.02±0.18×107CFU/mL,两者之间无明显差异(P>0.05);Sa在polished钛片和SLA钛片48 h的活菌黏附量分别为6.98±0.21×107CFU/mL和7.03±0.18×107CFU/mL,两者之间无明显差异(P>0.05)。(3)菌落计数法显示:对比不同消毒方法对两组钛片Pg生物膜的消毒效果,两组钛片间无明显差异(P>0.05);通过CHX或PDT处理后生物膜中Pg活菌数明显少于PBS组(P<0.001);PDT组和CHX组的Pg活菌量无明显区别(P>0.05);联合组处理后两组钛片表面Pg活菌量明显低于单一应用组(CHX组或PDT组)(P<0.01)。扫描电镜观察联合组(CHX+PDT组)Pg数量减少,细菌形态有所改变,细胞壁皱缩。CLSM观察到经过不同方法处理后钛片Pg生物膜在厚度、细菌密度、活死菌比例呈现不同程度变化,联合组的生物膜死菌比例最高、生物膜厚度降低最明显。(4)菌落计数法显示:不同消毒方法对两组钛片Sa生物膜的消毒效果,两组钛片间无明显差异(P>0.05);与对照组PBS组相比,其他五种消毒方法均能降低两组钛片表面Sa活菌量(P<0.001);单一消毒方法中,两组钛片中PDT组表面Sa数量低于CHX组和H2O2组(P<0.05),CHX组和H2O2组在两组钛片表面Sa活菌量无差异(P>0.05);联合组(CHX/H2O2+PDT)处理后两组钛片表面Sa活菌量明显低于单一应用组(CHX组、H2O2组或PDT组)(P<0.001),CHX+PDT和H2O2+PDT两联合组之间无差异(P>0.05)。SEM观察PBS组的钛片表面Sa数量最多,细菌聚集成团分泌细胞外基质,联合组处理后细菌形态变化最明显,细菌数量骤减。CLSM显示CHX+PDT组H2O2+PDT组的Sa生物膜死菌比例最高,生物膜结构破坏最严重。结论(1)SLA钛片的粗糙度参数高于polished钛片,SLA钛片表面自由能低于polished钛片。(2)Pg和Sa在polished和SLA钛片的黏附量无差异。(3)0.2%CHX联合PDT比单一应用CHX或PDT能更有效杀灭不同钛片Pg生物膜。(4)0.2%CHX/3%H2O2联合PDT比单一应用CHX、H2O2或PDT能更有效杀灭不同钛片Sa生物膜。