拟南芥白化突变体pde191加糖变绿现象机制初步研究

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在拟南芥色素缺失突变体中部分突变体存在加蔗糖变绿现象。PDE191是一个转录终止因子家族的基因,其T-DNA插入突变体pde191呈现白化表型,我们发现pde191在加蔗糖时能够变绿,本研究旨在探索pde191加蔗糖变绿的机制。PDE191参与调控rpoA的转录终止。通过real-timePCR比较了变绿与未变绿的pde191中rpoA的转录终止情况,结果显示两者的转录终止效率未发生明显变化。为探讨糖在变绿过程中的作用,我们用蔗糖类似物帕拉金糖代替蔗糖培养pde191,结果显示pde191突变体不能变绿;另外我们添加蔗糖并同时添加蔗糖信号抑制剂KNO3培养pde191,pde191仍然能够变绿,显示糖信号抑制剂不能抑制突变体变绿。该结果初步显示pde191变绿需要蔗糖进入代谢途径。为进一步证实上述结论,我们用糖酵解终产物丙酮酸代替蔗糖,结果显示丙酮酸在一定条件下可以使白化pde191变绿,另一方面,我们同时添加蔗糖和糖酵解抑制剂2-脱氧-D葡萄糖培育pde191突变体,pde191不能变绿。该结果进一步说明pde191变绿需要糖进入代谢过程。由于质体编码的RNA聚合酶(Plastid-encodedpolymerase,PEP)对叶绿体发育起关键作用,我们比较了pde191在不加蔗糖和加蔗糖条件下培养时,其PEP-依赖基因的转录本的积累水平随时间的变化趋势,结果显示加蔗糖变绿pde191中PEP依赖基因转录本积累高于不加蔗糖培养的pde191,尤其在生长7d之后更加明显。我们进一步对比了PEP-依赖基因在可以变绿和不可以变绿的多个色素缺失突变体中其转录本的积累程度,结果显示可以变绿的突变体中PEP-依赖基因的转录本的积累程度整体高于不变绿的突变体中的积累程度。这就说明一定本底水平的PEP活性对变绿有重要作用。我们进一步检测了核酮糖1,5二磷酸羧化酶(Rubisco)大小亚基rbcL、rbcS在蛋白水平上随时间的积累变化,结果显示加蔗糖后pde191中rbcL、rbcS随时间呈现从低到高的积累趋势。总之,我们认为变绿过程需要糖进入代谢途径产生能量,供给叶绿体,维持叶绿体PEP的部分活性,最终pde191能够持续发育并缓慢变绿。
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