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目的:观察糖皮质激素(GC)对大鼠成骨细胞自噬的影响,探讨自噬在糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)发病机制中的作用。方法:选用雌性sprague-dawley(SD)大鼠120只,随机分为4组,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组注射生理盐水,低剂量组、中剂量组和高剂量组分别注射1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg地塞米松磷酸钠注射液,每周2次肌内注射,每周称重1次,每组均分别干预4周、9周、12周。干预前及干预结束后以双能X线吸收法(DXA)测定大鼠全身骨密度(BMD)。处死各组大鼠,透射电镜观察成骨细胞的自噬,采用原位杂交法和免疫组化法检测大鼠成骨细胞骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)、自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin1及Atg5的mRNA和蛋白表达水平。结果:1.对照组大鼠体重随时间逐渐增加;干预4周、9周、12周,低、中、高剂量组大鼠体重低于对照组(p<0.01),高剂量组大鼠体重低于较低剂量和中剂量组(p<0.05)。2.干预4周,低、中、高剂量组大鼠BMD均与对照组无差异(P>0.05),低、中、高剂量组之间BMD亦无差异(P>0.05);干预9周,低、中、高剂量组大鼠BMD均较对照组下降(P<0.05),低、中、高剂量组之间BMD仍无差异(P>0.05);干预12周,低、中、高剂量组BMD均较对照组下降(P<0.05),高剂量组BMD较低剂量和中剂量组下降(P<0.05)。3.干预4周,低、中、高剂量组大鼠成骨细胞OCN mRNA、OCN蛋白、ALP mRNA、ALP蛋白表达水平与对照组无差异(P>0.05),低、中、高剂量组之间OCN mRNA、OCN蛋白、ALP mRNA、ALP蛋白表达水平亦无差异(P>0.05);干预9周,高剂量组OCN mRNA、OCN蛋白表达水平较对照组下降(P<0.01),低、中、高剂量组ALP mRNA、ALP蛋白表达水平较对照组下降(P<0.01),低、中、高剂量组ALP mRNA、ALP蛋白表达水平无差异(P>0.05);干预12周,低、中、高剂量组OCN mRNA、ALP mRNA表达水平较对照组下降(P<0.01),低、中、高剂量组之间OCNmRNA、ALP mRNA表达水平无差异(P>0.05),低、中、高剂量组OCN蛋白、ALP蛋白表达水平均较对照组下降(P<0.05),高剂量组低于低剂量和中剂量组(P<0.05)。低、中、高剂量组干预4周、9周、12周OCN mRNA、OCN蛋白、ALP mRNA、ALP蛋白表达水平有差异(P<0.05),随干预时间延长,OCN mRNA、OCN蛋白、ALP mRNA、ALP蛋白表达水平逐渐下降。4.干预4周,低、中、高剂量组LC3mRNA、Beclin1mRNA、Atg5mRNA表达水平与对照组无差异(P>0.05),低、中、高剂量组之间LC3mRNA、Beclin1mRNA、Atg5mRNA表达水平亦无差异(P>0.05);低、中、高剂量组LC3蛋白、Beclin1蛋白、Atg5蛋白表达水平较对照组上升(P<0.05),低、中、高剂量组之间LC3蛋白、Beclin1蛋白、Atg5蛋白表达水平无差异(P>0.05);干预9周,不同剂量组LC3mRNA表达水平较对照组无差异(P>0.05),低、中、高剂量组Beclin1mRNA表达水平较对照组下降(P<0.05),低、中、高剂量组之间LC3mRNA、Beclin1mRNA表达水平无差异(P>0.05),高剂量组Atg5mRNA表达水平低于低剂量和中剂量组(P<0.05),高剂量组LC3蛋白、Beclin1蛋白表达水平较低剂量组下降(P<0.05),低、中、高剂量组之间Atg5蛋白表达水平无差异(P>0.05);干预12周,低、中、高剂量组LC3mRNA、LC3蛋白表达水平较对照组下降(P<0.05),高剂量组LC3mRNA表达水平低于低剂量组(P<0.05)。低、中、高剂量组Beclin1mRNA、Beclin1蛋白表达水平较对照组下降(P<0.01),低、中、高剂量组之间Beclin1mRNA无差异(P>0.05),高剂量组Beclin1蛋白表达水平低于低剂量和中剂量组(P<0.05)。低、中、高剂量组Atg5mRNA、Atg5蛋白表达水平较对照组下降(P<0.05),不同剂量组之间Atg5mRNA、Atg5蛋白表达水平无差异(P>0.05)。低、中、高剂量组干预4周、9周、12周,LC3mRNA、LC3蛋白、Beclin1蛋白、Atg5mRNA、Atg5蛋白表达水平有差异(P<0.05),随干预时间延长,LC3mRNA、LC3蛋白、Beclin1蛋白、Atg5mRNA、Atg5蛋白表达水平逐渐下降。低、中、高剂量组干预4周、9周、12周Beclin1mRNA表达水平有差异(P<0.05),低、中、高剂量组干预9周、12周Beclin1mRNA表达水平较干预4周下降(P<0.01),低剂量组干预12周较干预9周下降(P<0.05)。5.电镜下,干预4周,低、中、高剂量组成骨细胞胞浆内自噬体数量增加,干预9周和12周,低、中、高剂量组的成骨细胞胞浆内自噬体数量减少,细胞空泡化明显。结论:1. GC可能以时间和剂量依赖的方式抑制骨形成,减少BMD;2. GC短期作用于成骨细胞,诱发成骨细胞自噬;随时间延长,自噬活性受抑制;3.成骨细胞自噬活性的改变可能参与GIOP的发生。