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子宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,全球每年约有50万新诊断病例,每年约20万人死于子宫颈癌。子宫颈癌的治疗主要以手术和放疗为主、化疗为辅,但可产生严重的不良反应。寻找防治子宫颈癌的新方法仍是重要而迫切的课题。流行病学研究发现,人乳头瘤病毒(HPV)与子宫颈癌的发生密切相关,99.7%的子宫颈癌组织中可检测到HPV,其中57.4%为HPV l6。HPV的L1衣壳蛋白是病毒的结构蛋白,具有较强的免疫原性,E6和E7蛋白是癌蛋白,与宿主细胞的恶性转化有关。因此,针对HPV制备疫苗对于防治子宫颈癌具有重要意义。目前,虽然Merck和GlaxoSmithKline两大公司已发展了两种HPV疫苗,但是对发病后的患者无效,只能用于早期或未发病人群的预防性接种;而且该类疫苗必须使用佐剂,价格昂贵。本课题着手于发展预防兼早期治疗性HPV疫苗,并以减毒沙门氏菌为运载体,以期实现通过局部粘膜途径对子宫颈癌进行防治的目的。(1)构建pET28a-HPV16-L1质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达HPV16-L1蛋白,免疫小鼠后在小鼠血清中检测到抗HPV16-L1抗体。(2)构建pcDNA3.1-HPV16-L1质粒,电转化至减毒沙门氏菌PhoP/PhoQ株和Ty21a中,滴鼻免疫小鼠,在小鼠血清及阴道冲洗液中检测到抗HPV16-L1抗体,且小鼠血清中IL-2和IFN-γ水平升高。(3)构建pGC-siRNA-E6和pGC-siRNA-E7质粒,转染至人子宫颈癌细胞系Siha细胞,发现HPV16 E6和E7的转录与表达水平降低,细胞出现凋亡,凋亡机制与激活线粒体凋亡通路有关。建立子宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,电转染pGC-siRNA-E6质粒后,肿瘤生长受到抑制,其基因变化与体外实验一致。(4)构建pcDNA3.1-HPV16-L1-U6-siRNA-E6质粒,电转化至减毒沙门氏菌PhoP/PhoQ株,滴鼻接种于子宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,结果显示HPV16-L1与siRNA-E6具有协同抑瘤作用,亦说明通过粘膜接种途径可达到对异位靶部位的生物学效应。本文在国内外首次构建了HPV16-L1和siRNA-E6共表达质粒,并以减毒沙门氏菌为运载体,用于子宫颈癌的防治,为发展新型防治子宫颈癌疫苗提供了实验依据。