水稻外源DNA导入系的创建及其分子标记分析

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leinuo2222
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本研究以玉米(Zea Mays L.)和稗草(Echinochloa crusgalli)为外源DNA供体,通过花粉管通道法将外源总DNA直接导入至水稻受体R122中,创建水稻外源DNA导入系,并利用SSR标记技术对获得的主要导入系中微卫星座位进行PCR检测与扩增产物的测序;此外,利用导入系B99、M87、B93与受体R122杂交构建F<,2>群体,研究导入片段微卫星座位和主要变异性状的遗传特点,以及对导入系B99的主要性状进行基因定位.主要结果如下:1.将玉米和稗草的DNA分别导入水稻R122中,玉米DNA导入在D<,1>代产生的导入变异频率为3.81%,而稗草DNA导入在D<,1>代所产生的导入变异频率为1.48%.导入变异频率的高低可能与供体和受体之间的亲缘远近有关.2.通过外源DNA导入水稻,创建了M75、M76、M85、M86和M87等5个玉米DNA导入系,以及B93、B95、B96、B98、B99、B100和B105等7个稗草DNA导入系.3.利用微卫星标记对玉米和稗草DNA导入系进行分析,检测到不少SSR标记座位发了变异,变异类型主要有两种.4.对供体稗草和玉米、受体R122,以及导入系B99和M85中RM526、RM222、RM453和RM488等标记座位的PCR扩增DNA片段测序分析,证明了稗草和玉米DNA片段已成功地整合到水稻受体R122基因组中. 5.对B99/R122组合的F<,1>和F<,2>进行SSR标记分析表明,B99中的稗草DNA导入座位可以在杂交F<,1>和F<,2>代中稳定遗传.6.对导入系中变异性状稃尖颜色的遗传分析结果显示,B99中的稃尖紫色性状符合孟德尔遗传规律,受1对基因控制,该基因已定位在第6染色体上,与标记RM253和PSM349的遗传距离分别为0.8Cm和2.8cM.通过本研究,不仅创造了一批可供水稻育种直接应用的玉米和稗草DNA导入系,而且明确了外源DNA导入片段在受体基因组中具体的整合位置,直接从分子水平上证明了玉米或稗草DNA片段成功地整合到了水稻基因组中,实现了玉米和稗草DNA片段或基因向水稻的转移.这对于促进近缘物种和远缘物种中的有利基因在水稻遗传改良和育种中的应用具有重大的意义.
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