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幽门螺杆菌Helicobacter pylori,简称H.pylori或HP)是微需氧的革兰氏阴性菌,能够引起严重的胃十二指肠疾病,例如消化性溃疡、胃炎及胃癌等。由于其严重的致病性,近来关于H.pylori的研究受到更多关注。蛋白晶体学是测定蛋白结构的重要手段,对蛋白功能、致病机制以及药物设计等研究都具有重要意义,目前在H.pylori中的应用也更加广泛。目前仅有约300个H.pylori蛋白获得了晶体结构,还有大量蛋白没有进行结构分析。因此,幽门螺杆菌致病相关蛋白表达及结晶条件探索作为本学位论文的主要部分,并根据工作需要,承担了幽门螺杆菌多中心大样本的集中化培养结果统计分析工作。本文的第一部分研究主要是对H. pylori关键致病蛋白进行表达及结晶条件初步探索,共选择了37种H. pylori致病相关蛋白进行克隆表达,筛选出符合结晶要求的活性蛋白,通过蛋白纯化以及大量结晶条件的初筛来获得蛋白晶体。研究中成功表达了30种H. pylori致病相关蛋白,其中CagF、CagV、Cagδ、GyrB-N、 GyrA-N、HP0900、HP0175以及HP0170含有大量可溶成分；CagM、HP1173以及CagE为少量可溶,其余19种主要为包涵体。包涵体可用于潜在价值分析,Western blot实验表明,CagV、CagE、Cagβ、CagF、CagI、CagL、CagT、HP1299、FadA、GyrB-C、HP1111、HP0357、HP1476、HP1564与HP0549具有良好的抗原性,是潜在的药物靶点及诊断靶点。CagF、CagV、HP0175、GyrA-N、GyrB-N、HP0900与前期结果筛选出的3种可溶蛋白用于进一步的蛋白纯化与结晶分析。结晶成功的蛋白有GyrA-N、GyrB-N、CagV、CagF、HP0900、HP0175、Hsp60以及CbpA。其中CagV、HP0900、GyrB-N以及CbpA晶体生长条件少,需要优化条件以获得更多晶体；GyrA-N、CagF、HP0175以及Hsp60均有单晶生成,但晶体衍射分辨率不及5A；GyrA-N经过优化其晶体分辨率已经达到4A。本部分研究成功筛选8种H. pylori致病相关蛋白的结晶条件,方法比较成熟,完成了结晶过程中的关键工作,不仅可以为结构测定积累基础,也能够为Hpylori蛋白功能及致病机制研究提供依据。第二部分主要是对多中心大样本的集中化培养结果进行统计分析。收集的数据为2010年1月至2012年7月间,66452例接受胃镜检查病人胃粘膜标本的的运输及相关H. pylori培养结果,此外,还收集了5736例H.pylori阳性者的胃粘膜标本的运输及培养结果以进行平行分析。对不同传送组、不同传送环境温度以及不同医院等级的阳性率进行卡方检验等统计学分析。结果表明,66452份标本的H. pylori培养阳性率为31.66%,而5736份标本的培养阳性率为71.72%。5h传送组和24h传送组的培养阳性率分别为30.99%和32.84%；延迟传送组的阳性率显著降低,为26.25%(p<0.001),且当日平均气温超过24℃时H. pylori的分离率达到最低的23.17%。本研究结果表明,利用集中分离培养的策略,对H. pylori的个体化根除治疗提供支持,具有充分的可行性。