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我国长期采用细菌学结合临床症状的方法诊断结核病,它结合了痰涂片镜检、细菌培养、结核菌素皮肤试验(PPD皮试)和X线影像等检查的结果。但由于痰涂片阳性率低、细菌培养费时长,PPD皮试存在假阳性,以及X线影像检查特异性低,从而大大降低了对结核病诊断的效率。近些年一些新兴结核病实验室检测技术的应用,使结核病的检测更加快速灵敏。血清学检测技术就是其中的典范,这种技术具有操作简便、快速、稳定性好、无需特殊精密仪器、便于推广等优点,成为结核病诊断的良好辅助方法。然而,目前应用的结核抗原大多灵敏度很低,单一抗原在血清学检测时效果并不理想。本研究利用早期实验室建立的评价方法,在完善方法的同时,对四种结核分枝杆菌特异性蛋白抗原进行了克隆、表达和纯化。采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)和受试者工作特征曲线法(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)建立出一套抗原诊断效能的评价体系。然后,对四种重组结核抗原的诊断效能进行分析,进而分析出不同抗原组合的诊断性能,并以实验结果对评价方法进行佐证,最终评价得出最佳的抗原组合方式。研究通过文献检索、抗原表位分析等方法,筛选出CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX四种蛋白进行了克隆表达。成功纯化出重组蛋白CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX后,应用ELISA方法对其诊断价值进行了评价。测得这儿种蛋白的最佳包被浓度分别为2.79μg/ml、5.45μg/ml、9.00μg/ml和7.60μg/ml,最佳血清稀释度除Ag85B为1：400外,其余均为1：200。对CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX四种结核抗原及其不同组合的ELISA检测的评价结果显示,单一抗原中38kDa的诊断性能最佳,灵敏度为55.9%,特异度为87.8%,Youden指数为0.437；其余三种抗原的灵敏度从40.9%至47.9%不等,Youden指数均低于38kDa；抗原组合的诊断效能高于单种抗原,诊断效果最好的组合为38kDa+CFP10-ESAT6+HspX,灵敏度为75.3%,特异度为68.9%,Youden指数为0.442,实验结果证实其为最佳的抗原组合。本研究成功对CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX几种抗原进行了克隆、表达、纯化和检测性能评价,对之前的研究结果做出了进一步数据补充,对今后的血清学诊断方法提出了合理的抗原组合建议。