[目的]鼻咽癌是我国南方高发肿瘤之一,多数患者以颈部淋巴结转移为首发症状。鼻咽癌治疗以单纯放疗或者放、化疗同期治疗为主。经综合治疗,鼻咽癌5年存活率已升至70%左右,但仍有30%左右鼻咽癌患者治疗后出现局部复发、淋巴结转移或者远处转移。化疗耐药和放疗抵抗是治疗失败的主要原因之一。对放、化疗后复发和转移的患者,再次行放、化疗效果较差。靶向治疗和免疫治疗价格昂贵、副作用较大、疗效尚待观察。因此,寻找一种低毒、有效、经济的治疗药物成为目前鼻咽癌辅助治疗需解决的重要问题之一。研究发现,白藜芦醇能抑制多种肿瘤(包括鼻咽癌)细胞的增殖、诱导其凋亡,并能抑制部分肿瘤的转移,但对鼻咽癌转移的作用尚未见报道。本课题拟研究白藜芦醇对鼻咽癌转移的影响,并初步探讨其发挥抗鼻咽癌转移作用的相关分子机制。[方法](1)体外培养高转移能力的人鼻咽癌CNE2细胞株,用CCK8实验检测在0、5、10、20、40、80、160、320μM 共 8 个浓度及 24、36、48h 共 3 个时间点,白藜芦醇对鼻咽癌细胞的增殖抑制作用。(2)依据CCK8实验结果,选取0、10、20、40、80μM五个浓度进行后续实验,分别用不含基质胶和含基质胶的Transwell小室进行实验以检测不同浓度白藜芦醇对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的影响。(3)采用蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测0、10、20、40、80μM五个浓度的白藜芦醇对高转移能力鼻咽癌CNE2细胞株中E-cadherin、Vimentin、Hsp27、Ezrin 蛋白、基质金属蛋白酶 2(Matrix metalloproteinases-2,MMP2)及基质金属蛋白酶9(Matrixmetalloproteinases-9,MMP9)等相关蛋白表达的影响。(4)用免疫荧光实验检测0、10、20、40、80μM五个浓度的白藜芦醇处理下,鼻咽癌细胞CNE2中NF-κB/p65的核转位情况。(5)以鼻咽癌CNE2细胞注射裸鼠足掌皮下构建鼻咽癌原发灶模型,通过HE染色和免疫组化,检测不同剂量(Omg/kg、25 mg/kg、50mg/kg和100mg/kg)白藜芦醇灌胃对鼻咽癌细胞转移至腘淋巴结的影响。[结果](1)CCK8实验发现,白藜芦醇对鼻咽癌细胞CNE2有一定的增殖抑制作用,并且这种抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性。当白藜芦醇浓度为80μM以下,作用于CNE2细胞24小时,白藜芦醇对CNE2细胞的抑制率未超过50%。(2)Transwell实验检测发现,白藜芦醇能抑制鼻咽癌细胞CNE2的迁移侵袭能力。在0至80μM浓度范围内,随白藜芦醇浓度增高,对鼻咽癌细胞CNE2侵袭和迁移能力的抑制作用增强。(3)Western Blot检测发现,白藜芦醇能抑制基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达。白藜芦醇可增加EMT相关蛋白的E-cadherin表达水平,但对Vimentin表达水平无明显影响。随着白藜芦醇浓度增高,转移相关蛋白Ezrin、Hsp27的磷酸化水平明显下调,但对总Ezrin、Hsp27无明显影响。(4)免疫荧光实验发现,白藜芦醇能抑制NF-κB/p65的核转位,在0至80μM浓度范围内,这种抑制作用呈浓度依赖性。(5)动物实验发现,白藜芦醇灌胃治疗对荷瘤小鼠体重无明显影响,但明显减轻瘤侧腘淋巴结的肿大程度。组织学检测显示,白藜芦醇灌胃明显抑制了鼻咽癌细胞由足掌皮下成瘤部位向腘淋巴结的转移,在0至100mg/kg剂量范围内,这种抑制作用呈剂量依赖性。[结论](1)白藜芦醇对高转移能力的鼻咽癌CNE2细胞有一定的增殖抑制作用,并且这种抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性。(2)在体外,白藜芦醇明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的侵袭迁移能力,抑制作用呈剂量依赖性。(3)白藜芦醇灌胃治疗能抑制鼻咽癌由裸鼠足掌皮下成瘤部位向腘淋巴结的转移,抑制作用呈剂量依赖性。(4)白藜芦醇可能通过抑制Ezrin、Hsp27的磷酸化,进而抑制NF-κB/p65核转位,最终下调MMP2、MMP9的表达,上调E-cadherin的水平,从而抑制鼻咽癌的侵袭迁移能力。