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背景族腺癌发病机制复杂,难以早期诊断,临床上确诊膜腺癌患者的手术可切除率低,术后生存期相对其他肿瘤较短。然而,关于膜腺癌发病机制的研巧表明,膜腺癌的发生经历了相当长的过程,从获得关键的致病基因突变、逐渐发展为膜腺癌前病变、最终发展为膜腺癌,需要经历大约十年的时间。膜腺癌前病变如能早期诊断、及时治疗,可提高该疾病的治疗效果;然而,略床上缺乏早期筛查膜腺癌前病变的标志物。MicroRNA是一种22个碱基长度的核糖核酸,能在血清中稳定存在,是一种潜在的血清诊断标志物。KrasG12D突变转基因小鼠通过肤腺细胞特异性启动子,仅在膜腺细胞内产生具有致癌活性的Kras6i2D突变蛋白;该小鼠可自发经妨巧常膜腺-膜腺癌前病变-膜腺癌"过程。通过构建繁殖KrasG12D突变小鼠,并在膜腺癌前病变阶段留取小鼠外周血清,通过microRNA芯片和实时定量PCR的方法,定量测定KrasG12D小鼠外周血清中特异性高表达的microRNA,为临床筛选族腺癌前病变的候选分子。目的1.饲养KraseisD转基因小鼠,无药物干预,培养族腺癌前病变自然病程组小鼠;2.通过雨蛙化,诱导KrasG12D;突变转基因小鼠产生族腺炎,培养膜腺炎-族腺癌前病变组小鼠;3.通过microRNA忍片,筛选出膜腺炎-膜腺癌前病变中血清离表达microRNA;4.通过生物信息方法,筛选出microRNA分子作为验证对象;5.通过实时定量PCR,检测候选的microRNA在膜腺癌前病变血清的表达来量。方法1.通过剪取小鼠鼠患消化提取DNA;再通过特异性引物,扩增KrasG12D突变基因和Cre重沮酶基因;进而确定小鼠基因型;2.通过腹腔注射雨蛙狀,诱导KrasG12D突变转基因小鼠产生族腺炎;再通过控制不同注射时间段,得到不同程度的膜腺炎-膜腺癌前病变;通过小鼠解剖,膜腺取材、固定、脱水、包埋等步骤,将不同阶段膜腺炎-膜腺癌前病变小鼠的组织进行保存;3.通过苏木精-伊红染色,显微镜下随机取视野,并按照国际通用的膜腺癌前病变评分系统对膊腺癌前病变进行评分。通过免疫組化染色,评价肤腺浸润的免疫细胞种类和数量;4.通过小鼠眼球后静脉取血,采集小鼠自然病程过程中外周清;5.通过microRNA芯片,对小鼠血淆中的microRNA丰度进行测定。通过严密的后期计算分析,筛选出膜腺炎-族腺癌前病变中高表达的血清microRNA指标;6.通过生物信息方法,筛选出在膜腺癌或癌前病变的组织或血样中高表达的microRNA;7.通过实时定量PCR的方法,对于巧片中筛选出的microRNA进行逐一筛选。进而确定在小鼠膜腺癌前病变中高表达的microRNA。结果1.通过小鼠鉴定,繁疆饲养,实验中一共饲养了小鼠143只,其中LSLKrasG12D阳性且Pdxl-Cre阳性的双阳性突变转基因小鼠15只;2.赎腺炎-族腺癌前病变姐中双阳性小鼠6只;3.赎腺癌前病变自然病程组双阳性小鼠9只;3.通过苏木精-伊红染色、评分,确定了全部KrasG12D突变小鼠均有族腺癌前病变,免疫姐化评价了膜腺内浸润的免疫细胞种类;4.通过microRNA巧片检测及统计学分析,筛选出在膜腺炎-族腺癌前病变组血清中高表达microRNA共54个,其中文献中报告过具有肤腺癌或肤腺癌前病变姐织特异性的有10个。通过实时定量PCR检测,发现miR-210-3p的microRNA在族腺癌前病变外周血清中高表达。结论KrasG12D突变转基因小鼠可模拟膀腺癌前病变过程,该动物模型血清中筛选microRNA的策略可仔,miR-210-3p是膜腺癌前病变潜在分子标记物。