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第一部分凋亡抑制基因Survivin在卵巢癌细胞中的表达目的:测定Survivin蛋白在三种卵巢癌细胞系中的表达,选择其中Survivin表达较高的细胞系进入后续部分的实验。方法:引入三种卵巢癌细胞系:A2780/DDP、SKOV3、HO8910,分别进行体外培养。通过免疫荧光技术定性、Western-blot方法定量测定Survivin蛋白的表达水平。结果:①免疫荧光测定结果:以各种细胞系中荧光细胞发生率做比较,HO8910、SKOV3、 A2780/DDP三种细胞系的荧光细胞发生率分别为75.34%±2.52%、74.77%±2.65%、81.04%±2.12%;②Western-blot测定结果:以各种细胞系中Survivin/β-actin做比较,HO8910、SKOV3、 A2780/DDP三种细胞系的比值分别为0.624±0.028、0.638±0.029、0.702±0.017。综上,HO8910细胞系和SKOV3细胞系的Survivin蛋白表达量差别不大(P>0.05);A2780/DDP细胞系的Survivin蛋白表达量较前两者高(P<0.05)。结论:HO8910、SKOV3、A2780/DDP细胞系均有Survivin蛋白高表达,A2780/DDP表达量更高,该细胞株适合进行Survivin基因靶向沉默研究。第二部分超声联合LHRHa-靶向微泡介导psh-Survivin转染对卵巢癌A2780/DDP细胞侵袭及转移能力的影响目的:通过超声破坏LHRHa-靶向微泡转染pshRNA-Survivin,观察RNA干扰对人卵巢癌A2780/DDP细胞survivin基因的沉默效应及对细胞侵袭转移能力的影响。方法:构建靶向survivin基因的短发夹状RNA重组表达质粒pshRNA-Survivin。将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为7组:空白对照组、单纯质粒组、质粒+普通微泡组、质粒+靶向微泡组、质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组及质粒+靶向微泡+超声辐照组。分别给予相应处理,应用western-blot检测survivin蛋白的表达;MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质粘附能力;利用transwell小室检测卵巢癌细胞侵袭转移能力;western-blot检测细胞中MMP-2、E-cadherin蛋白表达。结果:①与对照组比较,质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组、质粒+靶向微泡+超声辐照组survivin蛋白明显降低(p<0.05),穿透重组基质膜数目明显降低(p<0.05),细胞中MMP-2蛋白表达明显下降(p<0.05),E-cadherin蛋白表达明显增强(p<0.05)。其中质粒+LHRHa-靶向微泡+超声辐照组survivin、MMP-2蛋白表达量,穿透重组基质膜数目明显低于质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡组+超声辐照组,而细胞E-cadherin蛋白表达明显高于质粒+超声辐照组、质粒+普通微泡+超声辐照组(p<0.05)。②与对照组比较,质粒+普通微泡+超声辐照组、质粒+LHRHa-靶向微泡+超声辐照组细胞粘附能力明显降低(p<0.05);质粒+靶向微泡+超声辐照组细胞粘附能力明显低于质粒+普通微泡+超声辐照组(p<0.05)。结论:超声破坏LHRHa-靶向微泡可有效增强pshRNA-Survivin对卵巢癌A2780/DDP细胞Survivin的靶向沉默效应,并降低其侵袭转移能力,可望为卵巢癌提供一种有效的辅助治疗方法。