【摘 要】
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Keap1/Nrf2-ARE信号通路是保护细胞免受氧化损伤的内源性抗氧化通路。当水生生物面临环境毒物胁迫时,会触发Keap1/Nrf2-ARE信号通路产生反应。本文研究了Keap1/Nrf2-ARE信号通路中核心转录因子Nrf2与Mafk之间的作用,以及他们对下游谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）的调控作用。微囊藻毒素刺激下,肝胰腺、鳃、肾中Cp Mafk表达呈现上调趋势。在肝胰腺中,Cp Mafk m
【基金项目】
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国家自然基金:贝类Keap1/Nrf2信号通路参与消减微囊藻毒性的分子机制（31472305）；
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Keap1/Nrf2-ARE信号通路是保护细胞免受氧化损伤的内源性抗氧化通路。当水生生物面临环境毒物胁迫时,会触发Keap1/Nrf2-ARE信号通路产生反应。本文研究了Keap1/Nrf2-ARE信号通路中核心转录因子Nrf2与Mafk之间的作用,以及他们对下游谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）的调控作用。微囊藻毒素刺激下,肝胰腺、鳃、肾中Cp Mafk表达呈现上调趋势。在肝胰腺中,Cp Mafk m RNA表达在12和72 h极显著上调;在鳃中,Cp Mafk表达12和48 h显著上调;在肾中,Cp Mafk表达72和96 h显著上调。经si RNA沉默Cp Nrf2和微囊藻毒素MC处理组与MC组相比,肝胰腺、鳃、肾中Cp Mafk表达呈现下调趋势。其中肝胰腺中的变化最为明显。在肝胰腺中,Cp Mafk m RNA表达在12、24、48、96 h极显著下调;在鳃中,Cp Mafk表达48 h极显著下调,72和96h显著下调;在肾中,Cp Mafk表达24 h极显著上调,96 h极显著下调。与NS组相比,注射ds Cp Mafk的48 h,Cp Mafk m RNA表达水平分别下降了45%。ODN1组在24 h Cp Mafk m RNA表达水平下降了46%;ODN2组24和48 h出现干扰效果,Cp Mafk m RNA表达水平分别下降了32%和49%,与ODNyx组对比,48 h有干扰效果;ODN3组24和48 h出现干扰效果,Cp Mafk m RNA表达水平分别下降了41%和46.8%,与ODNyx组对比Cp Mafk m RNA表达水平都有显著的下降;ODN4组24和48 h出现干扰效果,Cp Mafk m RNA表达水平分别下降了60%和32%,与ODNyx组对比,Cp Mafk m RNA表达在24 h水平显著下降;ODN5组24和48 h出现干扰效果,Cp Mafk m RNA表达水平分别下降了45%和44%,与ODNyx组对比Cp Mafk m RNA表达水平都有显著的下降。在不同干扰情况下,与NS组相比,Cp Mafk干扰效果为41%和46.8%时,Cp Nrf2m RNA表达极显著下降,Cp Mafk干扰效果为60%时,Cp Nrf2 m RNA表达显著下降;与ODNyx组相比,Cp Mafk干扰效果为46.8%时,Cp Nrf2 m RNA表达下降极显著。与NS组相比,Cp GPx m RNA表达出现极显著下调;与ODNyx组相比,Cp Mafk干扰效果为41%和60%时,Cp GPx m RNA表达分别出现显著下调和极显著下调。褶纹冠蚌中Nrf2的缺乏会影响Mafk的转录水平,褶纹冠蚌的Mafk缺乏,同样会引起Nrf2转录水平下降。结果证明褶纹冠蚌的Nrf2和Mafk两个转录因子之间存在直接或间接的调控关系。原核表达GST-Cp Nrf2蛋白,蛋白质沉降技术与质谱联用显示GST-Cp Nrf2蛋白能与褶纹冠蚌组织蛋白中的Mafk蛋白结合,酵母双杂实验,进一步验证褶纹冠蚌Nrf2与Mafk之间存在直接作用关系。褶纹冠蚌GPx的启动子序列全长为1974 bp,预测显示Cp GPx启动子序列具有三个TATA-box,三个CAAT-box,含有多种转录因子结合位点,包括Nrf2、Ap-1、c-Myc、NF-kappa B、Smad3、Smad4、ARE元件等。凝胶阻滞显示,GST-Cp Nrf2蛋白无法与Cp GPx的启动子在体外结合。双荧光素酶报告基因实验表明Cp Nrf2和Cp Mafk对Cp GPx的启动子为负向调控。
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