目的 通过检测皮肌炎(dermatomyositis，DM)患者外观正常皮肤、肌肉及外周血中人类疱疹病毒1型(又称单纯疱疹病毒-1，herpes simplex virus 1，HSV1)、2型(单纯疱疹病毒-2，HSV2)、4型(EB病毒，Eptein-Barr virus，EBV)、5型(人类巨细胞病毒，human cytomegalovirus，HCMV)的特异性DNA序列，探讨皮肌炎与这四型人类疱疹病毒(human herpesvirus，HHV)之间的相关性。 方法 一、实验材料 1、病例资料 皮肌炎患者的32份外观正常皮肤、29份肌肉及31份外周血标本取自42例经临床、病理、肌电图和血清肌酶检查确诊的病例，所有病例均来自中国医科大学附属第一医院及沈阳市第七人民医院皮肤科。 2、对照资料 (1)正常对照：正常皮肤36份、正常肌肉26份及健康献血员外周血46份； (2)阳性对照：HSV1感染的细胞中提取的DNA作为HSV1的阳性对照；EBV和HHV8共感染的细胞系(BC-1)中提取的DNA作为EBV的阳性对照。 (3)阴性对照：在PCR反应体系中以灭菌双蒸水代替DNA模板进行扩增反应。 二、实验方法 l．DNA的提取 采用酚一氯仿法提取皮肤、肌肉及外周血白细胞中DNA，并以紫外分光光度计测定浓度及纯度后，于一20℃保存待用。 2、PCR技术 所提取的DNA均以内对照引物PCO3／PCO4进行聚合酶链反应（elrwe。e chain reachon，PCR）扩增人 p一球蛋白基因，产物片段长度 110hp，阳性标本人选本实验。用 HSVI、HSVZ、EBV。HCMV的通用引物P—l／P—2以 PCR技术检测上述病毒的 DNA序列，目的片段长度分别为 518hP、slsbP、524hP和 589hP。PCR反应后，对其产物进行琼脂糖凝胶电泳，并可直接将扩增为589hp的HCMV分辨开来。 3、限制性核酸内切酶酶切鉴定 以通用引物P—l／P－2扩增的产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定为阳性片段者瞩 左右）利用 DNA片段回收试剂盒回收，再以限制性内切酶BalnHI和Sma对回收片段进行酶切反应，其产物以 8％聚丙烯酸胺凝胶电泳（polyacryltalde gel electrophoresis，PAGE）鉴定，从而区分HSVI、HSVZ及EBV。 结 果 一、PCR结果 ＊内对照：所有标本均可被PCO3／PCO4引物扩增出110hp片段。 2、阳性对照：以通用引物P—l”—2扩增从HSVI感染细胞和BC－1细胞中提取的DNA，均出现长度约为520hp的目的片段。 3、阴性对照：均无扩增条带出现。 ·二· 4、皮肌炎组：32份外观正常皮肤中有5份、29份肌肉中有6份J 份外周血中有 5份扩增出长度约 520hP的目的片段产物； 5、正常对照：36份正常皮肤上6份正常肌肉及46份健康献血员外周血中未见到500hp－ODbp之间的目的片段。 二＊CR产物的酶切分析结果： 皮肌炎患者的标本中5份外观正常皮肤在份肌肉及4份外周血中检出的520hp左右的产物回收后分别被 Balnlll和 Sma切成247 hp、277hp和100hp、。obp两段，与预期结果及EBV阳性对照一致，证实为EBV DNA来源；另外从1份外周血中检出的520hp左右的产物回收后能被Sma切成476hp和42hp，但不能被BamH切断，与预期结果及HSVI阳性对照一致，证实为HSVIDNA来源。EBV在皮肌炎患者外观正常皮肤、肌肉及外周血中无同时阳性者，但在1例皮肌炎合并类风湿关节炎患者的外观正常皮肤及肌肉中同时阳性。在所有标本中均无EBV与HSVI同时阳性者，并且均未检出HSVZ及HCMV DNA。 经 x‘检验，皮肌炎患者外观正常皮肤与正常皮肤p；＝0．046人肌肉与正常肌肉（Pz＝0．043）以及外周血与健康献血员外周血o。＝0．048）的EBV检出率差异有显著性。皮肌炎患者外周血与健康献血员外周血（P．＝0．403）HSVI检出率差异无显著性。 结 论 1、部分皮肌炎患者外观正常皮肤瞩／32人肌肉组织K09）以及外周血N0）检测出 EBV DNA片段，与正常对照的皮肤、肌肉以及外周血的EBV检出率相比，差异有显著性，提示EBV可能与皮肌炎有一定的相关性。 2、部分皮肌炎患者外周血门／3）检出 HSVI DNA片段，而健康献血员的外周血中未检出HSVI。经统计学处理显示两者检出 ·3·率的差异无统计学意义，提示HSVI可能与皮肌炎无关。 3、所有皮肌炎患者的皮肤、肌肉和外周血标本均未检出IISvZ及 HCMV DNA，提示皮肌炎与 HSVZ及 HCMV可能无关。