【摘 要】
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为研究新发现的ActRIP3成熟蛋白在小鼠组织中的分布情况,首先采用一步法RT-PCR获得编码ActRIP3全长及N末端的cDNA;将该cDNA TA克隆入pMD 18-T载体,经DNA测序等鉴定插入基因正
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为研究新发现的ActRIP3成熟蛋白在小鼠组织中的分布情况,首先采用一步法RT-PCR获得编码ActRIP3全长及N末端的cDNA;将该cDNA TA克隆入pMD 18-T载体,经DNA测序等鉴定插入基因正确的TA克隆,并将目的基因亚克隆入融合蛋白型重组表达载体pGEX4T-1,构建重组表达质粒pGEX-ActRIP3及pGEX-ActRIP3N,在大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导,表达上述两种GST融合蛋白,蛋白产量约占大肠杆菌总蛋白量的20~30﹪.采用常规石蜡切片技术,利用制备的抗ActRIP3 C末端抗体进一步分析了ActRIP3蛋白在小鼠组织中的分布,免疫组织化学实验结果显示ActRIP3蛋白在心脏有广泛的高水平表达,在神经胶质细胞、精原细胞、肾小管、肾上腺髓质和肝血窦有选择性表达,在小脑皮质呈区域性表达,而在脾脏没有表达.
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