蜡状芽孢杆菌CZ阿拉伯糖异构酶的基因克隆表达及催化生产L-核酮糖的研究

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhurx180
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
L-阿拉伯糖异构酶(L-AI;EC5.3.1.4)可以催化醛酮糖的异构化反应,实现从L-阿拉伯糖经一步转化为L-核酮糖。L-核酮糖是近年来发现的一种功能性单糖,属于稀有糖的一种。在生物、医药、保健、食品等领域具有重要的应用价值。为了更好地利用廉价原料L-阿拉伯糖,得到产量更高的L-核酮糖。本论文以蜡状芽孢杆菌CZ为出发菌株,将其中的L-阿拉伯糖异构酶克隆到枯草杆菌WB800中并使其表达出L-阿拉伯糖异构酶,对其酶学性质也进行了优化。蜡状芽孢杆菌CZ中L-AI基因的克隆实验包括L-阿拉伯糖异构酶基因的扩增,L-阿拉伯糖异构酶基因与pMD18-T simple载体的连接,L-阿拉伯糖异构酶基因在大肠杆菌JM110中的扩增,L-阿拉伯糖异构酶基因序列的测序及序列分析等四个部分,同时对目的基因和连接转化及基因序列进行检测。结果表明,L-阿拉伯糖异构酶基因成功扩增并且成功与T载体连接转化到大肠杆菌JM110中。测序结果表明,扩增出的L-阿拉伯糖异构酶基因全长1,824bp,编码608个氨基酸,与已报道的L-阿拉伯糖异构酶的分子量大小大致相吻合,这证明了克隆得到的DNA片段就是所需要的L-阿拉伯糖异构酶基因。L-AI基因的表达实验包括质粒pBE3-ara转化枯草WB800、验证质粒pBE3-ara转化枯草WB800是否成功、酶活力测定三个部分,同时对连接转化及有无酶活进行检测。结果表明,质粒pBE3-ara成功转化到枯草WB800菌株并且成功表达出L-阿拉伯糖异构酶。在以上实验的基础上,对L-阿拉伯糖异构酶催化L-阿拉伯糖生成L-核酮糖进行酶学性质研究。单因素实验包括:碳源、温度、pH、时间、酶浓度(酶与底物反应比例)、金属离子、表面活性剂。实验结果表明,通过标准曲线计算生成的L-核酮糖含量及其转化率得到单因素最佳条件为:碳源L-阿拉伯糖,温度85℃,pH7.0,时间24h,表面活性剂CTAB,酶浓度(酶与底物反应比例)0.2E+0.8S。由实验数据得知,对实验结果影响显著性大的三个因素为温度、pH、时间。根据这一结论运用响应面分析法(Responsesurface methodology,简称RSM)对其进行酶学性质优化,得到最佳组合为:温度84℃、pH7.0、时间25h时,转化率将达到最大值10.53%,验证实验转化率为11.65%;与预期基本相符。本实验对通过将蜡状芽孢杆菌CZ中的L-阿拉伯糖异构酶基因进行克隆表达及酶学性质优化,有助于提高L-阿拉伯糖异构酶产量及利用L-阿拉伯糖异构酶催化优化L-核酮糖产量的提高,利于生产中调控和工业生产L-核酮糖。
其他文献
随着中国经济发展的新常态,习惯了增长的中央空调市场终于在2015年开始走了下坡路。政府投资项目减少,民间资本也趋于保守,导致了整体项目市场持续低迷。企业间原有的市场定
定位的概念自20世纪被提出以外,经历了将近50年的演进,而品牌定位理论则经历了USP理论、品牌形象论和定位理论这三个最主要的阶段。对于企业长期的发展规划和短期的竞争策略,
路面损坏信息的智能获取对道路规划、建设、养护方面有着重要的意义,是提高道路智慧化管理的重要手段。车载激光扫描系统可以获取路面的三维点云信息,为路面损坏提取提供了全新的数据支撑。本文利用车载激光点云数据,研究一种基于特征增强的路面损坏提取方法。主要问题在于:三维点云数据离散分布,直接处理效率较低;路面损坏的边缘和内部区域形状特征各异,难以结构化表达。基于以上问题,本文深入开展研究,通过增强激光点云特
二穗短柄草(Brachypodium distachyon)是单子叶植物新型模式植物,属于禾本科(Graminea)早熟禾亚科(Pooideae),植株矮小(15-20cm),生活周期短。本实验以二穗短柄草幼苗为研究材料,人工模拟
目的:研究STYK1/NOK基因在肝癌细胞系HepG2(肝母细胞瘤来源)和Huh-7(肝细胞肝癌来源)中的作用并明确其作用机制。探讨过表达STYK1/NOK对HepG2细胞凋亡、细胞增殖的影响,反向验证,抑制STYK1/NOK蛋白表达对HepG2细胞凋亡、增殖及细胞周期的影响。随后,在Huh-7细胞中验证,明确STYK1/NOK对肝癌细胞系细胞增殖的影响,以期揭悉STYK1/NOK影响肝癌细胞增殖
在信息化战争和科技强军的背景下,我军现代化程度不断提高,武器装备得到迅速发展,这对装备试验测控系统提出了更高的要求。全球卫星导航系统(GPS)作为外测手段引入测控系统以
“健康中国”理念的提出,为我国的健身事业带来了积极蓬勃的发展;物质文明与精神文明的进步让志愿者队伍不断壮大,特别是随着城市化进程的不断推进,商品房制度的逐渐建立,住宅小区的发展建设逐渐取代了农村村落,越来越多的人变成了社区居民。由于全民体育活动的形式与体育运动休闲的范围开始逐渐向社区化迈进,因此社区体育志愿者在此种大环境下应运而生,社区体育志愿者队伍也随着全民健身事业不断壮大。探讨社区体育志愿者服
目的:本课题主要是通过研究评估亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效的各种方法的进展,从而探讨彩色多普勒超声在临床新生儿颅脑疾病中的应用价值,为新生儿颅脑疾病的诊治提供相关理论依据。本研究主要从以下两个部分探讨彩色多普勒超声在临床新生儿颅脑疾病中的应用价值:1、第一部分:依据我院亚低温治疗新生儿HIE过程中,使用多普勒超声评估其治疗的疗效,通过临床指标数据的分析来进一步探讨多普勒超声的临床应用价值。2
随着VLSI技术的进步,发展包含数十万个处理器的高性能大型多处理器系统已经成为可能。处理器之间的连接模式称为该系统的互连网络,它可以用图来表示,其中图的顶点表示系统中
需求预测是铁路货运组织和规划的基础。准确预测铁路货运需求,探索不同因素对铁路货运需求的影响程度,是科学制定铁路运输计划的前提,同时对于国家未来的铁路建设投资方向有重要的参考价值。铁路货物运输需求的实现需要一定的运输能力作为保证,它是市场需求与自身供给的制衡结果。铁路货物周转量是能综合反映宏观环境对货物运输的需要以及运输部门提供的货运工作总量的重要统计指标。因此,本文采用货物周转量作为反映铁路货运需