{研究背景与目的} 肿瘤自杀基因疗法是目前认为最具有临床应用潜力的基因治疗策略之一，它要求自杀基因能选择性地在靶肿瘤细胞中表达，而在正常细胞中不表达，以最大限度地杀伤肿瘤细胞，最小限度地损伤正常组织。一个可能满足这一要求的方法是利用肿瘤特异性基因调控元件驱动自杀基因表达。现已知道，肿瘤血管生成对于肿瘤生长、浸润、转移都具有重要作用。这一复杂过程由肿瘤细胞分泌的血管生成因子引发，其中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）起着关键作用。VEGF主要在肿瘤细胞以及受到肿瘤刺激的周围基质细胞中表达。浸润性肿瘤常常血供不足，导致有些区域缺氧。无论是在体外或是在体内，缺氧对VEGF基因表达均起着主要的调节作用。缺氧首先诱导产生缺氧诱导因子HIF-1，后者与 VEGF 5‘侧区缺氧反应元件（HRE）结合，从而激活VEGF基因表达。因此有可能以VEGF基因启动子设计肿瘤自杀基因疗法，利用肿瘤特定的生存环境，如缺氧，来调控自杀基因选择性地在靶肿瘤细胞中表达，从而达到治疗肿瘤的目的。 本研究将建立一种由腺病毒介导的、受VEGF启动子驱动的自杀基因转移系统（AdVEGF-tk），利用该系统对体外培养的肝癌细胞和二乙基硝亚胺诱导的大鼠肝癌模型进行治疗试验，期望VEGF启动子调控自杀基因HSV－tk在缺氧的肿瘤组织中特异性表达，成为一个可能适用于多种恶性实体瘤的基因治疗方案。｛方法｝ 实验过程主要由三个部分组成：一采用简化的腺病毒载体构建系统AdEasySystem构建携带受人VEGF启动子调控HSV－tk基因表达的重组腺病毒载体AdVEGF－tk。同时构建由巨细胞病毒（Cytomegaalovirus，CMV）强力启动子调控TK基因表达的腺病毒载体AdCMV－TK，用作对照。 二 用重组腺病毒载体AdvEGF－tk和AdCMV－tk感染肝癌细胞株Hep-G2和 中文扩要 一 正常肝细胞L02这两种细胞，经过缺氧和不缺氧条件培养后，再予以GCV处理 5天后，用MTh法检测受染细胞对GCV的敏感性，以了解VEGF启动子能否调 控HSV－tk基因表达以及这种表达是否具有肿瘤细胞特异性和缺氧特异性。 三最后通过瘤内注射和肝动脉灌注法使重组腺病毒感染二乙基亚硝胺诱导 的WSfor大鼠肝癌，联合GCV处理，观察治疗前后肿瘤变化和大鼠生存率，以 了解 VEGF启动子能否调控 HSV－tk基因／GCV特异地杀伤体内肿瘤。 ｛实验结果｝ 通过AdEasy System我们构建成功高滴度的重组腺病毒载体AdVEGFrk和 AdCMV．h。在体外实验，携带受VEGF启动子调控HSV一比基因表达的重组 腺病毒载体 AdVEGF－h联合 GCV处理可杀伤在缺氧和不缺氧环境培养的肿瘤细 胞HepGZ而不杀伤在不缺氧环境培养的正常细胞L02，在缺氧条件下感染了 AdVEGF．tk的肿瘤细胞对GCV的敏感性明显要比不缺氧条件时高。在体内实验 中，瘤内注射腺病毒载体AdVEGF－tk，联合GCV处理可明显延缓大鼠肝脏肿瘤 生长速度；经肝动脉灌注AwEG卜比再加GCV处理，可明显减缓肿瘤生长并延 长大鼠的生存时间，也未观察到明显的毒副反应。 ｛结论｝ 实验结果表明，我们所构建的腺病毒介导的VEGF1K基因转移系统联合GCV 处理可特异地杀伤体内、体外缺氧的肿瘤细胞，且没有明显的毒副反应。由于 VEGF启动子具有大多数实体瘤所特有的缺氧反应活性，因此这一探索性结果有 可能应用于各种实体瘤的自杀基因治疗研究。