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炎性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)分为克罗恩病(Crohn’s disease,CD)和溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)两种,其中以UC最为常见,UC主要表现为严重腹泻、失血和蠕动功能逐渐丧失。NLRP3炎性小体、ERK(1/2 extracellular regulated protein kinases)和p38被发现与UC发病机制密闭不可分,已成为近年来UC研究热点。沙棘多糖(Seabuckthorn polysaccharide,SP)由实验室自提,前期研究已表明其对于CCL4诱导的小鼠急性肝损伤,LPS/D-galN诱导的肝衰竭中相关炎性表达存在预防治疗效果。由此,我们推测SP对于炎性疾病UC可能存在保护作用。本实验主要通过利用DSS(Dextran Sulfate Sodium,DSS)模拟UC模型探讨沙棘多糖对其保护机制。48只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组(n=12):对照组(ctrl)、DSS模型组(dss3.5%)、美沙拉嗪阳性药物组(dss+mes)、沙棘多糖治疗组(dss+sp)。实验共28天。SP组口服200mg/kg/d共28天,其余组口服蒸馏水。第22天,Mes组服用60 mg/kg/d美沙拉嗪7天。同时,用3.5%的DSS溶液替代饮用水。连续饮用DSS溶液7天后处死小鼠。采集血液和结肠组织样本,以备日后研究。结果表明,与对照组相比,DSS组出现体重减轻、大便出血、大便稀等症状。根据这些症状计算的疾病指数(DAI)显著增加,结肠长度显著缩短。说明溃疡性结肠炎模型的建立成功。与DSS组相比,SP组结肠长度明显增加,DAI指数显著降低。结肠组织HE染色结果显示,与DSS组相比,SP组肠壁水肿较轻,肠绒毛上皮完整,中性粒细胞浸润减少,炎症程度减轻,同时SP显著降低DSS诱导的IL-1β、IL-6炎症因子的表达。Western blot分析表明,SP显著降低了DSS诱导的NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1 β的表达。进一步研究表明,在SP和Mes给药后,ERK1/2和p38 MAPK(丝裂原活化蛋白激酶,MAPK)的磷酸化水平降低,SP促进ZO-1蛋白的表达。体外实验部分,为了进一步探索沙棘多糖的抗炎作用,我们分别采用LPS和LPS+ATP激活巨噬细胞,研究沙棘多糖的抗炎作用及其机制。根据CCK-8测定SP最佳浓度为 6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml。LPS+ATP 激活 NLRP3 炎性小体细胞模型,LPS单独激活MAPK信号通路。SP浓度梯度预治疗细胞2h,500ng/ml LPS刺激6h,2.5μMATP刺激30min,收集细胞。结果表明,与DSS组相比,SP组降低了细胞上清中IL-1β、TNF-α、IL-6的表达以及基因水平NLRP3、IL-1β、IL-6和促进IL-10表达;Western-blot检测结果也显示与DSS组相比SP组抑制了 NLRP3炎性小体成分和效应因子以及ERK和p38 MAPK信号通路相关蛋白表达。结论:SP通过抑制NLRP3炎性小体成分和效应因子以及p-ERK和p-p-38 MAPK炎性信号通路发挥抗炎效应,为建立治疗UC绿色环保类药物提供依据。