研究背景肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)为常见的功能性胃肠病(fuuctional gastrointestinal disorders,FGIDs),全球发病率为9.8%～12.8%,发病具有多因素性,机制假说繁多,症状特异性差,确诊困难。IBS患者常因腹部症状、粪便性状改变、排便频率异常等就诊。在排除器质性疾病的漫长过程中,治疗持续性差,导致症状反复、频繁就医,严重影响患者生活质量和心身健康。根据罗马Ⅲ和罗马Ⅳ的诊断,IBS主要包括 4 种亚型:便秘型 IBS(IBS-constipation,IBS-C),腹泻型 IBS(IBS-diarrhea,IBS-D),混合型 IBS(IBS-mixed type,IBS-M)以及未确定型 IBS(IBS-unclassified,IBS-U),其中,IBS-D在我国发病率最高,是IBS最常见的类型。中医针对IBS-D治疗具有一定优势,并认为其病因多集中于情志所伤、饮食不洁、素体虚弱等几个方面,而参考病程漫长、病情反复频发的疾病特点,久病及肾,导致脾肾阳虚的证型变化,辨证论治采取温肾健脾法进行治疗。进一步针对温肾健脾法治疗IBS-D的随机对照研究进行meta分析,认为本法在治疗IBS-D整体疗效方面确有优势,同时安全性高、不良反应少。温肾健脾方是由治疗五更泻的经典名方四神丸加减化裁而来,临证治疗脾肾阳虚证IBS-D获得较好疗效,并通过研究证实其可明显缓解患者焦虑抑郁和腹痛腹泻症状,考虑其治疗可能是通过脑-肠互动发挥了作用。蛋白组学作为从系统化的角度解读疾病的研究方法,有助于从蛋白质的表达中挖掘疾病特征和治疗规律,而目前针对脾肾阳虚证IBS-D,运用蛋白组学方法进行机制及疗效探索尚属空白。研究目的基于脑-肠互动,采用TMT蛋白组学技术探索温肾健脾法干预脾肾阳虚证IBS-D大鼠的作用机制。研究方法1.通过国内外文献分析,综述IBS目前的中西医病因病机、诊治和蛋白组学研究进展。2.采用meta分析,对温肾健脾法治疗IBS-D的临床疗效及安全性等进行评估。3.基于前期动物实验研究,对脾肾阳虚证IBS-D大鼠进行行为学观察及腹泻症状、内脏敏感性和肠道动力的疗效评价。4.基于TMT蛋白组学技术,分析温肾健脾法干预脾肾阳虚证IBS-D大鼠结肠组织和海马组织重点差异蛋白的变化,并探索脑-肠互动的作用途径。研究结果1 中西医研究进展的文献综述IBS的发病发展为多因素共同作用的结果,其中脑-肠互动异常为其重要病机。现代医学治疗手段主要包括药物治疗、饮食和心理治疗等,但往往难以充分缓解患者症状、控制病情反复。作为最常见的临床亚型,IBS-D的蛋白组学研究较少,与脾肾阳虚证相关的蛋白组学研究尚属空白。中医治疗IBS-D从症状、体质入手,以整体观、恒动观的角度进行分析,认为脾肾阳虚证为本病的常见证型之一,并通常运用温肾健脾法进行治疗,疗效较为满意,但中医药的治疗机制尚未明确,值得进一步研究。2 温肾健脾法治疗IBS-D的荟萃分析检索 Cochrane Library、Pub Med、Embase、CNKI、CBM、万方数据库和维普中文科技期刊数据库自建库至2017年01月20日关于温肾健脾法治疗脾肾阳虚证IBS-D的临床随机对照试验(Randomized Controlled Trial,RCT),共纳入10个RCTs。分析后发现:主要结局指标评定中,温肾健脾法治疗脾肾阳虚证IBS-D的整体疗效较西药常规疗法体现出了优势,在腹痛、腹泻症状改善方面二者无明显差异;中医证候疗效评价方面,由于只有4项RCTs报告了中医证候疗效,样本量过小,无法判断是否有统计学差异(P=0.05);复发率、不良反应方面,温肾健脾法较常规西药治疗的复发率低、不良反应少,但由于评价的样本量小,结果的普遍性较局限。研究证实温肾健脾法指导了多种方药用于脾肾阳虚证IBS-D的临证治疗并具有一定优势。3 温肾健脾法治疗脾肾阳虚证IBS-D大鼠的疗效评价基于前期研究基础,进行温肾健脾方治疗脾肾阳虚证IBS-D大鼠的疗效评价后发现:温肾健脾方中剂量(1.55g/kg/d)和高剂量(3.10g/kg/d)在腹泻症状、内脏敏感性和肠道动力方面的改善较为明显,并可达到与匹维溴铵相似的疗效;此外,温肾健脾方中剂量治疗脾肾阳虚证IBS-D大鼠,在行为学改善方面有一定优势。4 温肾健脾法干预脾肾阳虚证IBS-D大鼠脑-肠互动蛋白组学研究筛选脾肾阳虚证IBS-D模型大鼠与正常组大鼠结肠组织的差异蛋白,并分析不同治疗组的蛋白表达改变,确定了 3个主要蛋白(Wbp11、Gsk3b和Tgm2)和3个次要蛋白(Cox6b1、Acss2 和 Mrpl12),并发现存在 Metabolic pathways、Oxidative phosphorylation、Ribosome、Alzheimer’s disease、Huntington’s disease 和 Spliceosome 6 个信号通路的改变。在不同方向提示了脾肾阳虚证IBS发病与肠道环境、动力、炎症、免疫及神经调节等改变相关,而温肾健脾方治疗后蛋白表达回归,提示了其在以上方面有调节作用,并于维持神经稳态方面可能存在优势。筛选脾肾阳虚证IBS-D模型大鼠与正常组大鼠海马组织的差异蛋白,并分析不同治疗组的蛋白表达改变,确定了 1个主要差异蛋白(Slc4a7)和3个次要差异蛋白(Cacnb2、Rbp4和Rgs14)。我们发现海马体中差异蛋白Slc4a7与结肠组织中差异蛋白Tgm2在IBS-D发病的作用机制均涉及神经递质谷氨酸和谷氨酰胺,二者于造模后共同呈现上调趋势,推测二者在IBS-D发病过程中引起了内脏高敏感、肠道免疫和神经稳态状态改变,且二者的相关性可能是基于脑-肠互动实现的;进一步行ELISA验证,确定结果与质谱分析具有一致性。此外,差异蛋白Cacnb2、Rbp4和Rgs14在中枢系统和肠道存在双重作用,推测其可能参与了IBS-D的脑-肠互动过程。温肾健脾方影响了海马蛋白的表达,可能通过参与以上蛋白的调节过程,降低了应激改变和内脏敏感性,调节了神经稳态、肠道动力和免疫等,从而发挥了治疗作用。研究结论1.文献综述及Meta分析发现,中西医对IBS-D的疾病理解有异同之处,而以温肾健脾法指导中药临证治疗IBS-D的整体疗效突出。2.温肾健脾方中剂量(1.55g/kg/d)和高剂量(3.10g/kg/d)对脾肾阳虚证IBS-D大鼠的腹泻症状、内脏敏感性和肠道动力等有明显改善作用;同时,温肾健脾方中剂量在行为学改善方面有一定治疗优势。3.蛋白组学研究发现,脾肾阳虚证IBS-D在肠组织及海马组织中均存在调节肠道粘膜与菌群环境、动力、炎症、免疫和神经等的蛋白表达异常;海马组织中Slc4a7与结肠组织中Tgm2的表达上调可能诱发了脾肾阳虚证IBS-D的脑-肠互动异常;温肾健脾方参与调节海马及结肠蛋白的表达,可能通过降低应激改变和内脏敏感性、维持神经稳态、调节肠道动力和免疫等发挥了治疗作用。