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Pax3是胚胎发育中生肌前体细胞移行、增殖、分化及神经胚层发育的重要调控因子。人与小鼠Pax3突变均可导致胚胎时期神经嵴的发育异常，从而引起多种异常表型，与瓦尔敦堡综合征、横纹肌肉瘤、神经管缺陷畸形等疾病有密切联系。Wbct小鼠是通过ENU诱变手段获得的白斑突变小鼠，在先前的研究中，吴宝金等将其突变基因初步定位于小鼠第1号染色体距着丝粒约41.6cM处。本研究在先前初步定位工作的基础上，确定了Wbct白斑突变表型的遗传模式，并确定该表型是由Pax3基因无义突变引起的。在成功进行突变基因鉴定的基础上，建立了Wbct突变小鼠基因型分析方法，对Wbct纯合子小鼠胚胎期死亡进行了观察与分析。本论文的工作由两部分组成。
1.Wbct小鼠白斑表型突变基因的精确定位及鉴定。
将B6背景的突变杂合子与正常B6小鼠交配，计算G1代小鼠中突变小鼠与正常小鼠数目，将其与单基因显性遗传模式的理论数值进行卡方检验，确定遗传模式；将B6背景的Wbct突变杂合子与正常D2小鼠杂交获得F1代突变小鼠(尾部白化)，再将F1突变小鼠回交B6小鼠获得N2代突变小鼠，提取N2代突变小鼠尾尖DNA；选用位于第1号染色体的微卫星引物D1Mit180(距着丝粒41cM)和D1Mit415(距着丝粒52cM)，PCR扩增N2代突变小鼠基因组DNA进行精确定位；PCR分别扩增Wbct杂合子小鼠Pax3基因9个外显子序列，胶回收后测序；用DNA star软件对Wbct小鼠Pax3基因序列进行分析，预测碱基变化可能导致的氨基酸改变。
结果表明Wbct小鼠为单基因显性遗传，外显率为100％。在B6背景中，Wbct突变杂合子主要表现为尾部白化，腹部白斑较大，并且白斑大小差异较小。而在与DBA杂交过程中发现(B6×D2)F1代突变小鼠尾部白化，但白斑明显减少或消失，[(B6×D2)F1×B6]N2代小鼠尾部白化但腹部白斑大小差异较大，提示D2背景的介入对黑色素细胞发育障碍有部分代偿作用。微卫星检测结果显示D1Mit180与突变基因重组率为(3.19±2.51)％，D1Mit415与突变基因重组率为(9.04±4.10)％，D1Mit180与D1Mit415重组共为23例，重组率为(12.23±4.68)％，突变基因被定位于据着丝粒约43.87cM。对附近逐个基因功能分析发现位于44cM处Pax3基因突变小鼠表型与Wbct极为相似，故确定Pax3基因为Wbct突变的强力候选基因。PCR产物测序结果表明，杂合子小鼠Pax3第二号外显子的测序峰图上出现了明显的重叠波，用DNA star软件对测序结果进行分析显示，Wbct杂合子一条染色体上Pax3基因编码区第88位密码子由UGC变为终止密码子UGA，导致蛋白编码提前终止，是引起白斑突变表型的原因。
2.Wbct纯合子小鼠胚胎死亡的初步研究。
突变杂合子保种繁殖采用将突变杂合子小鼠与B6背景品系回交的方式，突变纯合子繁殖采用将突变杂合子互交的方式；将Wbct杂合子小鼠互交，选取孕期10.5d和12.5d的母鼠，取胚胎进行形态学观察；提取Wbct杂合子互交后代小鼠胚胎DNA，由于Wbct突变杂合子小鼠Pax3基因第二号外显子C变为A，引起HpyCH4V酶切位点的消失，我们以该突变位点为目标，在其两侧设计引物PCR扩增目的片段，使用HpyCH4V内切酶对PCR产物进行酶切，并对酶切结果与单基因显性遗传模式的理论数值进行卡方检验，验证其是否符合自由组合定律。
结果表明Wbct白斑杂合子互交繁殖获得127只后代，未出现新的表现型或见到扩大的白斑区域；将其中55只后代与正常B6配种，后代均为毛色正常的子代小鼠，说明后代小鼠中未出现突变纯合子小鼠，推测突变基因纯合致死。我们在Wbct杂合子小鼠与正常B6小鼠交配的后代中发现了一种出现弯尾表型的异常小鼠，该小鼠尾巴大多向背部方向卷曲，该表型尚未见其它文献报道。在表现异常的小鼠胚胎中，我们观察到异常胚胎羊膜血管明显减少，颜色苍白，体型明显比正常小鼠小，发育迟缓；有些小鼠胚胎头部明显凹陷，为神经管缺陷畸形的典型表现。我们对小鼠胚胎酶切鉴定的结果进行了统计，通过x2检验确定Wbct杂合子互交后代胚胎基因分离比例符合1∶2∶1的自由组合规律。
综上所述，Wbct小鼠为深入研究Pax3基因功能及Warrdenburg综合征、NTDs等多种人类疾病动物模型的建立提供了宝贵的研究材料。