论文部分内容阅读
本文以荷叶为原料,研究了荷叶中总黄酮化合物的提取与纯化工艺。运用化学分析、色谱、光谱及质谱等仪器分析技术和方法,对荷叶中黄酮化合物的结构及其生物活性进行了初步研究。主要研究结果如下:1荷叶黄酮提取工艺条件的优化本试验考察了提取液、浓度、时间、温度和料液比五个单因素对荷叶总黄酮提取率的影响,采用三元二次旋转正交组合设计进行试验,建立了提取温度、提取时间、提取料液比提取工艺参数间的数学模型,方程为Y=67.03+2.68x1+0.16x-2+2.94x3-2.06x1x2-0.43x1x3+0.41x2x3-4.74x12-4.33x22-4.93x32,经计算机模拟寻优确定了用Tween80助提的最佳工艺条件:提取液为1%Tween80,浸提温度74.8~76.5℃、浸提时间38~43min、料液比1:25~1:28。可得最高提取率为59.5%。2荷叶黄酮纯化方法的研究比较5种大孔吸附树脂对荷叶黄酮静态吸附和解吸附能力,并对XAD16型树脂的动态吸附特性进行了研究。XAD16型树脂最佳纯化工艺参数为:上样液浓度1.1mg/mL,流速为1BV/h时,洗脱剂为50%的乙醇溶液,流速为2BV/h进行洗脱,洗脱峰对称性好。采用重结晶的方法进一步纯化荷叶黄酮,其纯度达92%。3荷叶黄酮的结构初步研究采用紫外、红外、质谱、高效液相色谱、气相色谱等分析手段,对荷叶黄酮化合物进行结构分析,推测该化合物结构为异鼠李素-3-O-葡萄糖苷。4荷叶黄酮生物活性研究(1)荷叶黄酮体外抗氧化活性研究分别运用邻苯三酚-鲁米诺、CuSO4-Phen-VC-H2O2和双氧水-鲁米诺化学发光体系测定了荷叶黄酮对超氧阴离子、体外双氧水、羟基自由基的清除作用,采用CuSO4-Phen-VC-H2O2-DNA体系测定了荷叶黄酮对体外DNA损伤的保护作用。实验结果表明荷叶黄酮具有较好的体外清除活性氧和DNA损伤的保护作用。采用比色法检测了荷叶黄酮对动物组织体外抗氧化作用的影响,结果表明荷叶黄酮能够有效地清除羟自由基,抑制由羟自由基引起的脂质过氧化、保护生物膜,减少红细胞溶血,减轻肝线粒体肿胀程度,提示具有很强的抗氧化能力。(2)荷叶黄酮对胰脂肪酶、α-淀粉酶活性的影响研究了荷叶黄酮的浓度、作用时间、酶剂量等对猪胰脂肪酶、α-淀粉酶活性的影响。结果表明:(a)荷叶黄酮抑制猪胰脂肪酶活性是通过间接改变底物乳化来阻碍底物-酶结合达到抑制作用,呈非竞争性抑制;(b)荷叶黄酮对α-淀粉酶活性有抑制作用,且荷叶黄酮粗提物对淀粉酶活性抑制作用大于精制黄酮,提示荷叶黄酮对淀粉酶的抑制作用可能是物质间的协同作用。