头颈癌(Head and neck cancer, HNC)包括口腔癌,咽癌和喉癌,是世界上常见的恶性肿瘤之一。吸烟和饮酒是头颈癌发病的重要因素之一,人类乳头状病毒在头颈癌的发生过程中也起着重要作用。目前普遍认为除环境因素外,遗传因素包括家族病史及多种生物信息的遗传变异在头颈癌的发生发展中也起着重要作用。其中单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)是目前研究较为广泛的一种遗传变异,可以作为肿瘤发病风险预测的分子标志物,影响个体在相同暴露因素下对头颈癌的易感性。以往头颈癌遗传易感性的研究主要集中在编码基因上,例如细胞增殖凋亡基因、DNA损伤修复基因等,对于非编码的基因研究甚少。近年来,新发现了一类非编码小分子RNA-microRNA (miRNA),其长度为18-25个核苷酸,广泛存在于真核生物中, miRNA与多种肿瘤密切相关,其作为一类新型的癌基因和抑癌基因正逐渐被人们所关注,其对肿瘤的形成、转移、复发起着重要的调控作用。miRNA可以调控成百上千个具有不同生物功能的靶mRNA,可以通过碱基互补配对结合到把基因mRNA上的3’UTR区(3’untranslated regions)来调控靶基因表达。miRNA相关单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)可以调控miRNA的表达和功能,这些SNPs可以位于miRNA本体、侧翼及启动子区域,从而可能会影响：miRNA与其靶基因的结合,导致miRNA对其调控作用发生改变,特别是对于肿瘤发生发展相关的重要基因的调控。Let-7作为一种抑癌基因,是目前研究最为广泛的miRNA之一。在头颈癌中,Let-7的表达异常可以影响患者的预后。Let-7基因上的SNPs可能改变miRNA-mRNA的相互作用,从而改变Let-7的基因调控功能,影响多种恶性肿瘤的发生、发展过程。由于Let-7在头颈癌中的重要作用,因此,我们推测Let-7相关的多态性可能会影响中国汉族人群头颈癌的易感性。本研究采用病例对照研究设计,筛选出Let-7基因的潜在功能性位点作为研究靶点,探讨Let-7功能性多态与中国汉族人群头颈癌易感性的关联,并运用功能学实验进一步阐述这些位点的生物学意义,以期筛选出于中国汉族人群头颈癌相关的遗传易感性标志物,从而为高危人群的筛检和头颈癌的早期诊断和早期治疗提供科学依据。第一部分Let-7遗传变异与中国汉族人群头颈癌易感性的关联研究本研究采用病例对照研究设计,选取Let-7启动子区的两个功能性位点rs13293512和rs10877887,利用’aqMan实验技术在503例经组织病理学明确诊断的头颈癌新发病例和900例性别年龄与之匹配的健康对照中进行基因型检测,分析不同基因型与头颈癌风险的关系,同时探讨不同环境因素对头颈癌发生的影响。研究结果表明,携带rs10877887位点至少1个突变等位基因C的个体与携带TT基因型的个体相比,HNC患病风险差异无统计学意义(CC+CT对TT：调整OR=0.82,95%CI:O.90-1.23, P=0.087);与携带TT+CT基因型个体相比较,携带rs13293512位点2个突变等位基因C的个体显著降低头颈部肿瘤患病风险(CC对TT+CT:调整OR=0.73,95%CI:0.55-0.98, P=0.039)。研究结果显示,Let-7启动子区的多态性位点rs13293512可能与中国汉族人群头颈癌患者发病相关,而rs10877887与头颈癌易感性不存在显著关联。第二部分Let-7启动子区多态位点rs13293512与中国汉族人群头颈癌易感性的功能学研究miRNA广泛存在于生物体内,是一种大小约18-25个核苷酸的短链非编码小分子RNA,能够以不完全互补的方式与其靶基因mRNA的3’UTR(3’untranslated regions)的特定区域相结合,对靶基因的转录起着调控作用,从而影响靶基因的功能。研究认为,miRNA上的遗传变异可能会影响其与相应靶基因mRNA的3’UTR区域结合,从而影响miRNA对其靶基因的调控,因此,miRNA上的遗传变异可能通过改变miRNA与靶基因mRNA的结合从而对头颈癌易感性产生影响。我们根据第一阶段的研究结果,选取在第一阶段研究中Let-7启动子区与头颈癌遗传易感性有关的多态性位点rs13293512,采用双荧光素酶报告基因实验对所发现的阳性位点进行功能学研究。研究结果表明,携带rs13293512C等位基因的报告荧光素酶表达水平显著高于携带T等位基因,说明该多态性的存在确实影响了报告基因的表达。上述结果证明,Let-7基因启动子上的多态位点rs13293512可以通过影响该基因的调控能力来降低头颈癌的发病风险。