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目的:1.将ApoE(载脂蛋白E)与阳离子脂质体Lipofectamine 2000偶联,构建能特异转染肝(癌)细胞的基因运载体。2.检测在体外细胞实验中,ApoE-Lipofectamine 2000的转染特异性及转染效率,并检测其对细胞的毒性作用。3.通过ApoE-Lipofectamine 2000介导的pcDNA3.1-pSurvivin-TK联合更昔洛韦(GCV)系统的体内抑制试验,观察该系统对裸鼠肝癌模型的靶向杀伤作用。方法:1.将ApoE与Lipofectamine 2000偶联,制备ApoE修饰的Lipofectamine2000。2.在体外细胞实验中,质粒包裹实验分析脂质体与质粒的结合比;脂质体携带pGenesil-1质粒转染肝细胞HL-7702、肝癌细胞HepG2、人胚肾细胞HEK293T、大肠癌细胞SW480,并通过荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率;MTT法分析脂质体对细胞的毒性作用。3.在体内试验中,将HepG2细胞接种于裸鼠右腋皮下,建立肝癌裸鼠移植瘤模型;待肿瘤长至约为200 mm3时,将荷瘤裸鼠随机分为三组;A组:肿瘤空白对照组;B组:Lipofectamine 2000+pcDNA3.1-pSurvivin-TK+GCV治疗组;C组:ApoE-Lipofectamine 2000+pcDNA3.1-pSurvivin-TK+GCV治疗组。观察各组治疗后瘤体积及瘤重的变化,计算抑瘤率;RT-PCR法与Western blotting法观察脂质体介导的HSV-tk质粒在瘤组织中的表达情况;HE染色与TUNEL法观察治疗后移植瘤的凋亡坏死情况。结果:1.制备ApoE修饰的Lipofectamine 2000运载体,质粒包裹实验显示质粒与Lipofectamine 2000和ApoE修饰的Lipofectamine 2000的质量体积比分别为1:2,1:2.5时,可完全包裹质粒。2.流式结果表明,ApoE-Lipofectamine 2000对HL-7702和HepG2细胞的转染效率明显高于Lipofectamine 2000,转染效率有显著性差异,具有统计学意义(P<0.05,P=0.03,P=0.001)。在HEK293T、SW480细胞中,两种脂质体转染效率无明显差异,无统计学意义(P>0.05,P=0.93,P=0.55)。3.MTT实验表明ApoE修饰后的Lipofectamine 2000没有增加Lipofectamine2000对HepG2细胞的毒性作用(P>0.05)。4.成功建立裸鼠肝癌移植瘤模型;治疗后,与对照组相比,瘤体积和瘤重均减小,B、C组抑瘤率分别为(29.46±2.51)%,(46.18±1.79)%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05,P=0.007)。5.Western blotting与RT-PCR结果显示,在A组未见明显条带,B、C两组均检测到HSV-tk质粒成功表达。6.HE染色与TUNEL法显示,两种脂质体介导的HSV-tk质粒联合GCV治疗对肝癌移植瘤均具有一定的杀伤作用,但ApoE修饰后的Lipofectamine 2000介导的抑制作用更明显。结论:1.成功构建了一种肝癌靶向基因递送载体,ApoE-Lipofectamine 2000。2.ApoE修饰的Lipofectamine 2000对肝(癌)细胞具有较高的亲和力,能够靶向转染肝(癌)细胞。3.ApoE-Lipofectamine 2000介导的pcDNA3.1-pSurvivin-TK联合更昔洛韦(GCV)系统对裸鼠肝癌模型具有靶向杀伤作用。