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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)被公认为是严重危害全世界养猪业的重要病原,其感染可以引起多种圆环病毒相关疾病(PCV2-associated diseases,PCVD),包括断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征和母猪繁殖障碍综合征等疾病,导致巨大经济损失。PCV2是一种单链环状DNA病毒,是目前已知的最小的动物病毒之一,其感染的靶细胞主要是巨噬细胞、树突状细胞和淋巴细胞等多种免疫细胞,因此PCV2感染还可导致动物机体发生严重的免疫抑制。另外,PCV2感染还可促进多种病原的共感染。虽然疫苗免疫可显著降低PCV2相关疾病的发生,但却不能清除PCV2的感染。研究显示PCV2在养猪业中感染率可高达60%以上。然而,目前对于PCV2的感染和致病的详细机制尚不完全清楚。衣壳蛋白(Capsid protein,Cap)是PCV2主要的抗原蛋白,含有病毒的主要抗原决定簇,在病毒的识别和入侵过程中起重要作用。制备抗Cap抗体是研究PCV2致病机制的有利工具之一。但PCV2 ORF2全长在大肠杆菌中表达量低且多为包涵体形式存在,限制了Cap蛋白的表达量。为了制备抗PCV2b Cap蛋白的高效价多克隆抗体,我们克隆了不含核定位信号序列的PCV2b ORF2基因,并构建了含His标签的原核表达载体。将重组质粒转化到大肠杆菌中进行表达和条件优化,实现了重组Cap蛋白的高效可溶性表达。进一步使用镍柱进行纯化,将纯化后的Cap蛋白经透析浓缩再免疫新西兰大白兔,制备抗血清,获得了高免血清。并进一步以辛酸-硫酸铵沉淀法提纯IgG,以考马斯亮蓝染色验证抗IgG的纯化效果,结果显示只有重链和轻链两条带,表明纯化效果好。ELISA检测显示所制备抗体效价可达到1:10~7,表明抗体具有较高效价。应用该抗体对人工感染PCV2b的PK-15细胞、小鼠组织进行了免疫印迹、间接免疫荧光和免疫组织化学检测,结果表明该抗体在多种检测方法中均能与目的抗原发生特异性结合。应用该抗体对临床分离到的3株PCV2b病毒进行免疫印迹检测,结果显示该抗体可以与临床PCV2b毒株特异性结合,能够用于临床毒株的检测。综上所述,本研究构建了高效表达缺失NLS的PCV2b Cap蛋白原核表达载体,实现了Cap蛋白的可溶性表达且不影响Cap蛋白的免疫原性。利用纯化后的Cap蛋白作为免疫原制备了效价高、特异性强的抗Cap多克隆抗体。该抗体可以用于免疫荧光、免疫组化、免疫印迹以及临床PCV2b毒株的检测,为PCV2b的临床检测及病毒与宿主的相互作用研究提供了理想的候选工具。