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病毒性疾病是当前虾病研究的焦点。基因沉默是一种天然而古老的抗病毒机制,通过沉默同源的病毒基因或与病毒复制有关的宿主细胞基因,在病毒感染的不同时期抑制病毒的复制。Dicer是基因沉默途径中的重要起始酶,负责对病毒复制时产生的dsRNA识别并切割出能引起基因沉默的小分子RNA。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是世界及我国目前最重要的养殖品种之一,但它的Dicer酶基因的克隆和表达都未见研究。本文采用同源克隆结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从凡纳滨对虾体内克隆获得Dicer-1(命名为LvDcrl)基因,并通过病毒侵染后Dicer-1基因mRNA水平表达量变化及存在的剪切变异体,研究宿主抗病力与该基因mRNA水平的调控关系,以及病毒对基因沉默途径的破坏和干扰机制；通过幼体发育过程中该基因的表达变化,研究基因沉默途径在幼体变态-免疫网络中的作用。克隆获得LvDcrl基因的cDNA全长为7636bp,编码2473个氨基酸,比对结果显示该多肽链包括了Dicer-1的5个保守功能域：解旋酶Helicase、未知功能的结构域DUF283、PAZ (Pinwheel-Argonaut-Zwille)结构域、RNase结构域等5个保守的功能结构域。该基因在凡纳滨对虾的诸多组织均有表达,但在血淋巴内的表达量高于肝胰腺、肌肉组织、肠、脑和鳃等组织。在凡纳滨对虾的幼体发育过程中,LvDcr1的表达呈现阶段性变化。从受精卵至仔虾(P7)期间,都能检测到该基因的表达。从受精卵至破膜而出的无节幼体(N1)期间,其表达量逐渐下降。在对虾幼体发育期间,LvDcr1基因表达量呈现出无节幼体3期>无节幼体1期、糠虾幼体3期>糠虾幼体1期、仔虾幼体7期>仔虾幼体1期的趋势,这意味着同一幼体期间随着变态其免疫器官发育逐渐成熟。从整个发育过程来看,幼体进入仔虾后该基因表达出现一个明显的上升,意味其免疫器官发育接近于成虾。桃拉病毒(Taura syndrom virus, TSV)注射攻毒4h后,对虾血细胞中LvDcr1表达量开始逐渐增加,至8h时达到高峰,为0h表达量的8.77倍,之后逐渐下降,36h基本恢复与对照组一致的水平。鳃组织表达量从注射开始后逐渐增加至24h时达到高峰,此时表达量是对照组的6.74倍,之后至36h表达量逐渐下降至比对照组还要低的水平。该基因在血细胞和鳃组织中的表达明显上调,意味着该基因与抗病毒免疫有关。比较血细胞与鳃组织的时序表达,血细胞中该基因表达高峰值的出现早于鳃组织,并且表达上调更明显。表明血细胞对病毒的反应启动更快,反应强度更大。TSV感染的患病虾与健康虾比较,在带有TSV的个体中LvDcr1的mRNA出现剪接变异。在RNaseⅢ结构域序列中出现未被切割的内含子,而在解旋酶域序列中由于剪接变异出现了长型和短型两种转录本。这两种mRNA的剪切变异均影响该基因正常执行解旋与切割dsRNA的功能,从而抑制基因沉默途径发挥的抗病毒机制。这初步说明病毒也具有干扰基因沉默途径的机制。