减蛋综合征病毒(Egg Drop Syndrome virus,EDSV)是直径约为70-80nm的无包膜二十面体核衣壳的双链DNA病毒。它属于腺病毒科腺胸腺病毒属。EDSV于1976年首次在荷兰报道,当时从产蛋鸡中分离出该病毒。EDSV主要导致产蛋突然严重下降,以及外观健康的产蛋鸡产生无壳,薄壳,变色或变形的鸡蛋。EDSV基因组含有33,213个碱基对。它也被称为鸭腺病毒1(DAdV-1),鸭腺病毒A型,腺病毒127。六邻体、纤维蛋白和五邻体(penton)是EDSV的主要衣壳蛋白。五邻体蛋白在腺病毒入侵宿主细胞中起主要作用。腺病毒五邻体基质可以与细胞膜整合素结合并促进病毒入侵到细胞中。EDSV蛋白可能与其他腺病毒penton蛋白在病毒复制中具有相同的功能,而不仅仅是结构蛋白。因此,本研究的目的是表达五邻体,研究五邻体在病毒复制中的功能,并鉴定与五邻体相互作用的宿主细胞蛋白。为了找到EDSV五邻体蛋白的受体或与其有相互作用的配体,应用酵母双杂交(Y2H)方法进行筛选。选择10种蛋白作为潜在的蛋白相互作用候选物。为了确定相互作用,使用酵母回补实验来消除误差。结果表明10种蛋白质中有4种蛋白质即鸭GABA(A)受体相关蛋白1(GABARAPL1),鸭蛋白质核糖体蛋白SA(RPSA),鸭蛋白整联蛋白α4亚基(ITGA4),鸭肌动蛋白-β(ACTB)与EDSV五邻体蛋白有相互作用的配体。我们选择4种蛋白中的两种蛋白(GABARAPL1和RPSA)验证了它们与五邻体蛋白之间的相互作用,使用原核和真核表达系统来表达猎物蛋白和诱饵蛋白,然后通过体外GST pull-down实验验证其相互作用。结果表明GABARAPL1和RPSA与五邻体蛋白具有直接相互作用。在腺病毒的诊断中,常使用基于核酸的技术,例如通过PCR方法体外扩增病毒DNA。为了检测由EDSV引起的感染,我们建立了实时荧光环介导等温扩增技术(RealAmp)。该方法与PCR相比具有一些优点,包括灵敏性和特异性以及能够通过荧光信号观察在一个平台上同时进行扩增和检测。检测感染样品(尿囊液和细胞培养物)的EDSV,直接使用RealAmp方法,无需提取病毒DNA。RealAmp成功用于直接检测样品中EDSV纤维蛋白基因。RealAmp能在15-30分钟内扩增病毒DNA。灵敏度可达26 fg/μl,该方法特异性强,与其他DNA病毒无交叉反应。