柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠肝损伤的保护作用及机制研究

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目的:探讨柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤的保护作用及机制。
  方法:(1)分组:将128只健康雄性SD大鼠按照随机数字表随机分为4组:空白组、假手术组、模型组、柴黄清胰活血颗粒组(以下简称柴黄组),每组32只。(2)造模:采用经十二指肠乳头逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠1ml/kg的方法建立大鼠模型;假手术组开腹后仅翻动腹腔脏器后关腹;空白组不做任何处理。(3)药物配制及给药:将柴黄清胰活血颗粒流浸膏以0.9%的生理盐水溶解配制成0.12g/ml的药液,造模结束待各组大鼠苏醒后,柴黄组予以配制好的药溶液灌胃,按大鼠体重计算,每次10ml/kg,每6小时1次,假手术组灌胃等量生理盐水,空白组不做处理。所有大鼠术后禁食,自由饮水。(4)取材:各组大鼠于术后6h、12h、24h、48h各时间点分别处死大鼠8只,开腹后,观察胰腺的大体解剖结构,腹主动脉采血,处死大鼠后取胰腺及肠组织,开胸后,观察肺组织大体解剖结构及有无胸腔积液,取肺组织。(5)检测:用全自动生化分析仪进行淀粉酶、脂肪酶的检测;用血气分析仪进行氧分压、二氧化碳分压的检测并计算氧合指数;计算肺组织湿干重比值;胰腺及肺组织苏木素-伊红染色并进行病理评分;ELISA法检测肺组织中分泌型磷脂酶A2、TOLL样受体4的浓度及肠组织中分泌型磷脂酶A2的浓度;免疫组织化学法检测肺组织中核因子κB p65、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、细胞间粘附分子-1、水通道蛋白-1、JNK、p38MAPK蛋白的表达;RT-PCR法检测肺组织细胞间粘附分子-1、水通道蛋白-1、JNK1、p38MAPK mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测肺组织中JNK、P38MAPK及p-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达。(6)统计学方法:采用SPSS17.0软件进行统计分析,计量资料服从正态分布以(X)±S表示,不同组别在各个时间点的比较采用多次重复测量方差分析,各组内不同时间点的比较及组间同一时间点的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。以p<0.05判定为有统计学意义。
  结果:(1)与空白组比较,假手术组大鼠一般情况,胰腺及肺组织大体解剖观察无明显差异,淀粉酶、脂肪酶的活性,肺湿干重比,胰腺及肺组织病理评分,动脉血氧分压、二氧化碳分压、氧合指数水平,肺组织中分泌型磷脂酶A2、TOLL样受体4的浓度、核因子κB p65、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、细胞间粘附分子-1、水通道蛋白-1、JNK、p38MAPK的表达,肠组织中分泌型磷脂酶A2的浓度,差异均无统计学意义(p>0.05)。(2)与假手术组比较,模型组大鼠术后一般情况较差,出现竖毛、懒动、精神萎靡、饮水减少等表现。开腹后可见胰腺组织肿大,出现明显的充血、水肿、出血、坏死,胰腺及肠系膜出现明显白色皂化斑,胰腺与腹腔脏器黏连;开胸后可见少量胸腔积液,肺组织体积变大,呈暗红色,出现充血、水肿,表面可见散在出血点。胰腺组织的苏木素-伊红染色表现为胰腺结构紊乱,炎性细胞浸润及血细胞渗出,小叶间隔增大;肺组织苏木素-伊红染色表现为肺泡壁塌陷广泛融合,肺泡间隔增宽或塌陷,出现肺泡和间质水肿、出血,肺泡内液体积聚表现为肺不张,大量白细胞浸润及红细胞渗出,肺组织结构紊乱。淀粉酶、脂肪酶活性升高;胰腺组织病理评分、肺组织湿干重比及病理评分升高;氧分压及氧合指数降低,二氧化碳分压升高;肺组织中分泌型磷脂酶A2、TOLL样受体4浓度,核因子κB p65、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、细胞间粘附分子-1、JNK、p38MAPK蛋白的表达水平升高,水通道蛋白-1蛋白表达降低;肠组织中分泌型磷脂酶A2浓度升高,差异均有统计学意义(p<0.05)。(3)与模型组比较,柴黄组大鼠一般生命体征,胰腺、肺组织大体解剖观察好转;淀粉酶、脂肪酶活性降低;胰腺组织病理评分、肺组织湿干重比及肺病理评分降低;氧分压及氧合指数升升高,二氧化碳分压降低;肺组织中分泌型磷脂酶A2、TOLL样受体4浓度,核因子κB p65、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、细胞间粘附分子-1、JNK、p38MAPK蛋白的表达水平降低,水通道蛋白-1蛋白表达升高;肠组织中分泌型磷脂酶A2浓度降低;差异均有统计学意义(p<0.05)。
  结论:(1)柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤有保护作用。(2)柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤保护作用的机制可能与上调水通道蛋白-1的表达,下调核因子-κB p65、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、细胞间粘附分子-1、分泌型磷脂酶A2、TOLL样受体4的、JNK及p-JNK、p38及p-p38的表达,进而阻断JNK/p38MAPK信号通路有关。
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