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目的:本课题以丙酸睾丸酮致不孕大鼠(ASR)作为研究对象,同时施加药物干预,通过对各组大鼠的血清总胆红素(Tbil)、直接胆红素(Dbil)、间接胆红素(Ibil)和卵巢组织匀浆中HO-1活性,以及各组大鼠血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)水平,卵巢和子宫指数、卵巢病理形态学等变化的观察,以探讨逍遥丸对ASR卵巢HO-胆红素系统和卵巢功能的影响,及其治疗无排卵性疾病的作用机制。
方法:选用同批出生9日龄健康雌性SD大鼠颈背部皮下注射丙酸睾丸酮1.25mg/只(0.05ml/只)制作无排卵模型,正常组注射同等剂量的中性茶油作对照。第70日龄始连续阴道上皮细胞涂片两个性周期(每个性周期4~5天),阴道上皮细胞持续角化,提示无排卵大鼠模型制作成功。将模型大鼠随机分为2组。即模型组和治疗组。治疗组灌服逍遥丸混悬液,制法:将100丸(每8丸相当于生药3g)逍遥丸溶于125ml蒸馏水中制成混悬液,相当于0.8丸/1ml,生药0.3g/1m;用量:3.0g·kg-1·d-1(相当于临床用量的20倍),各组每天按照1ml/100g体重灌胃给药。连续给药7周。模型组及正常组灌服蒸馏水。阴道上皮细胞涂片,选择动情前期处死,观察比较各组大鼠卵巢病理形态学变化、卵巢指数、血清E2、P、T水平的变化和卵巢HO-1活性,血清Tbil、Dbil、Ibil含量的变化及其与性激素相关性。
所有数据均采用SPSS11.5统计软件,采用多组均数方差分析法,两两之间的比较采用LSD法。相关分析采用Pearson检验。
结果:1正常组、模型组、治疗组卵巢HO-1活性的均值分别为6.96±1.35、6.19±0.78、7.61±3.39,与模型组相比,正常组、逍遥组显著升高,其差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组与正常组相比无明显差异(P>0.05)。
2正常组、模型组、治疗组血清Tbil的均值分别为6.47±1.18、5.79±0.36、6.29±1.95,与模型组相比,正常组、治疗组显著升高,其差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组与正常组之间无明显差异(P>0.05)。
3正常组、模型组、治疗组血清Dbil的均值分别为2.02±1.16、1.71±0.42、1.64±0.16,模型组大鼠Dbil有下降趋势,但各组之间相比无显著性差异(P>0.05)。
4正常组、模型组、治疗组血清Ibil的均值分别为4.45±0.55、4.08±0.27、4.80±0.32,与模型组相比,正常组、治疗组血清Ibil的值显著升高(P<0.05)。治疗组与正常组相比无明显差异(P>0.05)。
5动物一般状况:各组大鼠均发育良好,毛色白而光泽,精神佳,活泼,反应灵敏,饮食、二便正常,体重增加。但模型组体重增加明显,活动较少,反应欠灵敏。
6正常组、模型组、治疗组卵巢重量系数的均值分别为3.72±0.06、3.03±0.06、3.61±0.04;子宫重量系数的均值分别为1.94±0.48、1.51±0.23、1.83±0.35。与模型组相比,正常组与治疗组的卵巢、子宫重量指数明显增加(均为P<0.01)。治疗组与正常组之间无明显差异(P>0.05)。
7卵巢光学显微镜形态学观察(HE染色):正常组和治疗组可见各发育期卵泡和黄体,模型组卵巢卵泡囊性扩张且无黄体。
8正常组、模型组、治疗组E2的均值分别为5.67±4.23,10.52±4.45,6.29±1.95;T的均值分别为3.98±0.30,5.00±0.24,3.80±0.32;P的均值分别为1.17±0.44,1.05±0.13,1.64±0.61。与模型组相比,正常组和治疗组E2、T显著性降低(P<0.01),各组之间P水平相比无显著性差异(P>0.05)。
9血清胆红素与E2、P、T激素的相关分析结果显示Tbil与T呈负相关,r=-0.325,P<0.05;Tbil与Ibil呈正相关,r=0.339,P<0.05;Tbil与Dbil呈正相关,r=0.827,P<0.01;E2、T与Ibil呈负相关,r分别为-0.404和-0.527,P分别<0.05和P<0.01。
结论:1逍遥丸可使无排卵大鼠体重增加,活动、反应情况恢复至正常状态。
2逍遥丸可使无排卵大鼠卵巢、子宫重量指数明显增加,改善卵巢形态结构,降低无排卵大鼠血清雌二醇、睾酮水平,使其接近正常。
3无排卵模型大鼠卵巢组织HO-1活性和血清胆红素低于正常组,推测HO/胆红素系统的活性降低可能与无排卵的发生有关。
4逍遥丸能显著增强无排卵大鼠卵巢组织HO-1的活性,推测逍遥丸可通过提高HO/胆红素系统的活性进而改善卵巢功能。