膜联蛋白是一类钙依赖性磷脂结合蛋白,形成进化上保守的多基因家族,在动、植物中广泛表达。在细胞各种生理功能中起重要作用。膜联蛋白A1(Annexin A1,简称AnxA1)是哺乳动物膜联蛋白家族中的一个重要成员,它与细胞增殖、分化、信号传递、炎症等密切相关,前期研究已发现它在精子中亦有表达,并呈区域性分布,推测与精子的一系列钙依赖事件如运动、顶体反应过程中的膜融合、受精过程中的精卵相互作用等有关。但目前它在生殖系统中的作用尚不明确,在睾丸中的表达定位尚未见报道,对其在精子中的定位研究还相当有限,且还未见关于它在精子中功能的较为直接的研究。本文以小鼠为实验对象,研究AnxA1在出生后不同发育时期睾丸中的表达与定位,以期了解它与睾丸出生后发育及精子发生的关系;同时,对处于不同成熟阶段及不同生理功能状态的精子进行AnxA1定位。此外,制备了AnxA1多克隆抗体并探讨AnxA1与体外受精的关系。本研究旨在为阐明AnxA1在生殖系统中的作用奠定一定的基础,可望为哺乳动物及人类受精机制的研究提供一定的理论依据,从而为辅助生殖技术、不育症诊疗与计划生育提供一定的理论指导。本实验分三部分。1膜联蛋白A1在小鼠睾丸不同发育阶段的表达与定位对1~8周龄小鼠睾丸进行AnxA1间接免疫组化染色及半定量RT-PCR以研究AnxA1的表达水平及其定位。结果显示:AnxA1在各级生精细胞中均有表达。其中精原细胞染色最强,主要分布在细胞核内;初级精母细胞多为弱阳性或阴性;圆形精子细胞AnxA1分布在细胞一侧顶体泡、顶体帽中,精子的AnxA1分布在顶体中。精子形成后留下的残余体亦呈强阳性染色。支持细胞未见明显阳性染色。对1、2、3、4、5、6、8周龄小鼠睾丸AnxA1免疫组化染色阳性强度即平均积分光密度进行图像分析结果分别是:2.94±0.36, 8.53±0.90, 7.32±1.22, 6.87±0.51, 5.59±0.53, 4.53±0.38, 4.64±0.40,单因素方差分析结果显示1、2、5周龄组的AnxA1免疫组化染色强度与其余各组均存在显著性差异(P<0.01),3周龄与4周龄间(P=0.26, >0.05)、6周龄与8周龄间(P =0.78, >0.05)无显著性差