论文部分内容阅读
研究目的:
确定葡萄胎的遗传学起源,检测在正常绒毛及不同遗传学类型的葡萄胎中,印迹基因H19/IGF2甲基化状态的差异及p57、IGF2表达的差异。初步探讨基因印迹异常在葡萄胎的发生及发展中的作用机理。
研究方法:
收集正常绒毛4例,葡萄胎新鲜组织、蜡块或切片共28例并获取双亲血样,提取DNA后通过微卫星多态性分析葡萄胎的遗传学起源,对葡萄胎进行分组;以正常绒毛为对照,通过甲基化特异性PCR方法检测印迹基因H19/IGF2在各组中甲基化状态的差异,通过免疫组化方法检测p57、IGF2在各组中表达的差异。
研究结果:
1.微卫星多态性分析将未知遗传学类型的23例葡萄胎分为1例 PHM和22例AnCHM,修正了组织病理学诊断。
2.MSP法检测了在正常绒毛及不同类型葡萄胎中H19启动子CpG岛的甲基化状态:DNA经过亚硫酸氢盐修饰后进行甲基化特异性 PCR扩增,葡萄胎及正常绒毛甲基化引物均有明显的特异MSP条带;正常绒毛非甲基化引物有明显的特异MSP条带,PHM特异性条带稍弱,CHM缺乏或仅有微弱特异性条带。
3.p57免疫组化染色显示正常绒毛周围的滋养细胞为强阳性表达;PHM为强阳性表达或稍弱;CHM(包括AnCHM和BiCHM)的绒毛外滋养细胞呈阳性表达,绒毛周围的滋养细胞不表达或微表达。
4.IGF2免疫组化染色在绒毛及不同类型葡萄胎中为(+)~(+++),阳性程度与其类型及预后无明显相关性。
结论:
1.通过微卫星多态性分析,以遗传学起源为基础可以弥补组织病理学诊断的不足与错误,更准确的将葡萄胎进行分类。
2.正常绒毛的启动子CpG岛部分甲基化,基因印迹正常存在;PHM启动子CpG岛部分甲基化,母系印迹保留;CHM的启动子CpG岛高甲基化,部分存在少量去甲基化,印迹丢失。
3.CHM(包括AnCttM和BiCHM)有明显的p57蛋白表达缺陷,PHM的p57蛋白表达基本正常。p57免疫组织化学染色可用于HM辅助鉴别。
4.IGF2免疫组化染色的阳性程度与绒毛、葡萄胎的类型及预后无明显相关性。