RNA编辑型AZIN1促进结直肠肿瘤血管新生的作用及机制研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:peterpan984
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:血管新生(angiogenesis)在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。在肿瘤形成早期,肿瘤直径超过2-3mm时,就必须生成血管来维持氧气和营养物质的输送。肿瘤的血管表现为孔隙多,表面粗糙,细胞间连接松散,使得肿瘤血管通透性增强,有利于肿瘤细胞的血道转移,且在肿瘤周围形成特殊的微环境。目前,抑制肿瘤血管新生的靶向药物被成功研发并广泛应用于临床,并取得较好的治疗效果。但是也出现了药物副反应、药效低、耐药等一系列问题。因此,探寻其他潜在的可作为抗肿瘤血管新生治疗靶点的分子就显得尤为重要。RNA编辑(RNA editing)是一种重要的转录后调节机制,发生A到I的RNA编辑的抗酶抑制因子1(antizyme inhibitor1,AZIN1)参与调控肿瘤发生发展的多种生物学行为。本文拟通过体内外实验阐明RNA编辑型AZIN1在肿瘤血管新生中的作用和机制。研究方法:1、采用Real-time PCR检测结直肠癌细胞系中AZIN1的表达。2、构建质粒,包装慢病毒,用慢病毒感染HCT 116和HT-29细胞,构建稳定转染野生型和编辑型AZIN1及对照的HCT 116和HT-29细胞系,用嘌呤霉素筛选并维持。3、Western blot和Real-time PCR分别检测稳转细胞系中AZIN1蛋白和mRNA的表达。4、提取对照组与野生型、编辑型组细胞的条件培养基(conditional medium,CM),与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行共培养。5、采用CCK-8法检测各组CM对HUVEC增殖的影响。6、采用划痕实验(Wound healing)和transwell实验检测各组CM对HUVEC迁移能力的影响。7、利用成管实验(tube formation),比较各组CM对HUVEC成管能力的影响。8、采用裸鼠移植瘤模型,每组十只,在裸鼠左侧接种6×10~5 HUVEC和3×10~6 HCT 116的细胞混悬液共100ul,右侧只接种3×10~6HCT 116细胞混悬液100ul,每周测量两次肿瘤体积。9、采用Micro-CT扫描检测每只裸鼠肿瘤内血管分布情况。10、Human angiogenesis Array实验检测野生型和编辑型组细胞CM中调控血管生成因子的表达,ELISA实验检测各组CM中Pigment epithelium-derived factor(PEDF)和Platelet derived growth factor(PDGF-AA)的表达量。11、非靶向代谢组学(metabolomic)检测各组CM中代谢物的差异。12、向HUVEC中加入梯度浓度的乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC),CCK-8检测NAC对HUVEC增殖的影响,transwell和划痕实验检测NAC对HUVEC迁移能力的影响,成管实验检测NAC对HUVEC成管能力的影响。结果:1、RNA编辑型AZIN1组的细胞条件培养基明显促进HUVEC迁移和血管形成,对HUVEC增殖能力无明显影响。2、RNA编辑型AZIN1组的裸鼠移植瘤体积明显高于对照组和野生型组,血管内皮细胞共培养移植瘤体积明显高于单独接种组。3、RNA编辑型AZIN1组的裸鼠移植瘤内血管密度明显高于野生型和对照组。4、RNA编辑型AZIN1组的细胞CM中PEDF显著低于对照组和野生型,PDGF-AA未见明显差异。5、RNA编辑型AZIN1组的细胞CM中NAC含量高于对照组和野生型组,外源加入NAC对HUVEC的影响呈现剂量依赖,高浓度NAC显著抑制HUVEC的生物学行为,低浓度NAC促进HUVEC的迁移成管能力,对增殖无明显影响。结论:RNA编辑型AZIN1促进血管内皮的迁移成管能力,可能通过上调NAC的表达和抑制PEDF的表达,来促进肿瘤血管生成。
其他文献
推断不同生物学条件下的基因网络扰动对于理解复杂疾病的机制有着很重要的作用。通常,我们使用假设数据服从多元正态分布的高斯图模型建模,来推断基因网络的扰动。但是,由于
伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为猪的一种重要病原体,在全球广泛传播。长期以来,PRV受到兽医学家、病毒学家以及神经生物学家的广泛关注及研究,目前对PRV的研究已经
海参性腺是海参加工过程中的下脚料,它含有与海参体壁相似的胶原蛋白成分,许多对人体十分关键的生物活性物质含量更高,如:多糖、多肽和皂苷等。肠道微生物是宿主的重要组成部
无线传感器网络作为物联网的感知网络,可以通过网络节点收集特定区域的信息,便于管理者的分析和决策,现已被广泛应用于环境监测、智慧城市、灾害预防等领域。但是由于传感器
iNKT细胞是一类独特的T细胞,它具有连接先天免疫系统和获得性免疫系统的作用。在激活以后,iNKT细胞可以迅速地引发细胞因子的分泌,并影响一系列免疫反应。与传统T细胞识别MHC
目的:应用二维斑点追踪成像技术(2D-STI)评估心脏淀粉样变(CA)患者左心房纵向应变及应变率的变化。研究方法:选取26例CA患者作为病例组与30例健康志愿者作为对照组,CA病例组按左
我国是世界上中低温地热资源非常丰富的国家之一,然而,地热资源的利用比例却很低,尤其是地热发电。地热和石油都富集于沉积盆地之中,油田通常也是地热田,油田区的地质资料十
喷涂作为当前热门的制造技术,广泛应用在各个行业中。喷涂所需的高温环境容易引起事故,需要对喷涂环境进行监测。另一方面,由于目前喷涂流程复杂,影响喷涂产品合格率的因素较多,需要对生产数据进行特征分析。本文针对汽车零件喷涂生产中的环境监测,利用云平台进行数据存储并从存储的数据中找出影响产品合格率的因素,并预测了在这些因素作用下产品的不合格率。首先申请阿里云ECS云平台,在阿里云服务器上搭建Node.js
研究目的:非糜烂性反流病(Non-erosive Reflux Disease,NERD)指有烧心反酸等临床表现、但在普通白光内镜下与正常无异、看不到黏膜破损的一种食管疾病,因此给镜下诊断及治疗
非线性Schr?dinger方程在物理、工程等众多领域应用广泛,特别是非线性分数阶Schr?dinger方程的研究得到越来越多学者的关注。本文首先研究二维非线性整数阶Schr?dinger方程,在空间离散上应用二阶精度的有限差分方法,对离散后得到的差分矩阵进行正交分解,可以应用离散傅里叶变换实现矩阵的乘积。在时间离散上,应用二阶紧致隐式积分因子方法(7)cIIF(8),并结合快速傅里叶变换(7)F