随着社会工业化和现代化步伐的加快，我国环境铅污染日益加重，儿童铅中毒的状况不容乐观。当儿章血铅水平达0.483μmol/L（10μg/dl）或以上时，即使没有产生明显的临床症状或体征，但已能对儿童的学习记忆能力造成损害。海马是大脑学习记忆的关键部位，而长时程增强效应（Long-term Potentiation，LTP）是哺乳动物海马学习和记忆过程的细胞模型。产生LTP的生物学基础之一是海马神经元突触上的N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体。NMDA受体（NMDAR）是一种兴奋性氨基酸受体，在脑的发育、学习与记忆、脑缺血等机制中起重要作用。NMDA R包括两个亚单位家族，即NMDA R1（NR1）和NMDA R2（NR2），NR2亚家族又由NR2A、NR2B、NR2C和NR2D四个亚单位组成，各亚单位的编码基因均已被克隆出来。在脑的不同发育时期及不同区域，各亚单位的表达水平不同。在哺乳动物生长发育期的海马，以NR1和NR2A、NR2B的表达为主。 生长发育期脑NMDA R是铅作用的重要目标，铅是NMDA R的非竞争性拮抗剂。离体海马神经元电生理研究发现，铅能抑制NMDA激活的全细胞电流，抑制NMDA R单通道的开放频率，且其抑制作用的强度与神经元的成熟程度有关，幼稚神经元对铅的抑制作用更加敏感。近年来，国内外学者对铅与NMDA R的研究，多局限于上述 离体海马神经元电生理实验研究。而铅是否影响 NMDA R亚单位 mRNA的表达，以及该作用与机体铅暴露水平的关系尚不清楚。 本研究通过建立生长发育期低水平铅暴露的系列大鼠模型，应 用半定量RT－PCR方法，检测大鼠海马N－甲基o－天门冬氨酸受体 （NMDA R）亚单位NRZA和 NRZB mRNA的表达水平，以揭示铅 对NMDA R基因的影响，从而探讨铅损害儿童学习记忆能力的神经 毒理机制。 材料与方法 材料： SD 大鼠出浙江大学医学院实验动物中心提供，血铅测定仪器为 美国 Perkin Elmer公司生产的AA700型原子吸收仪，血铅标准品出 美国疾病控制中心（CDC）提供。Trizol抽提液购自罗氏公司，Taq 酶购自美国PE公司，逆转录酶与PCR反应的其他试剂均购自上海 生工，NRZA与NRZB及内对照p－actin的引物也山上海生工合成。 方法： 1、动物模型的建立 以含醋酸铅的饮水作为铅暴露源，分别设立0刀25％组、0刀5％ 组和 0刀75％组，对照组喂以蒸馏水。SD雌鼠用上述饮水喂养 2 周后配种，怀孕3周娩出仔鼠，仔鼠ZI天起断乳，喂以与母鼠 相同的饮水。当仔鼠第7、14，ZI、28天时，每窝取卜 只，用 心脏穿刺法抽取0．sml血液测定血铅，然后断头处死仔鼠，在冰 浴中快速分离海马，保存在．70oC冰箱中备用。母鼠于铅暴露9 周时从股静脉抽取 lml血液用于血铅测定。用石墨炉原子吸收仪 测定血铅浓度。 2、RT－PCR实验 2 用Trizol抽提液抽提RNA，测定纯度与浓度后保存在－70℃ 冰箱中备用；用 OligodT和 AMV Rtase逆转录生成 cDNA；然后 让 NRZA 和 NRZB弓物分别与内对照6－actin弓物同管扩增 得到 目的产物。在2％琼脂糖凝胶上电泳，PCR Marker作为分子量对 照，DNA扫描仪扫描并测定DNA密度值间接代表mRNA量。3。数扼统计方涪 所有统计均用SPSSS刀统计软件在计算机上完成，mRNA相 对密度比值经过均数加1 的常用对数转换，所有数据都用均数土 标准差表示，除母鼠受孕率用卡方检验外，其余数据都用方差分 析的One－WayANOVA过程进行分析。 结 果1、各组母鼠铅暴露前与配种前体重均无显著差异（P＞0刀引。各暴露 组母鼠血．铅浓度与对照组比较均有显著差异叩＜0刀们）；0．0乃％ 组与 0．050、0．0250组之 l’。J也有显著差异（P＜0．05）。二、在各年龄段，各组仔鼠的体重均无显著差异（P＞0．0引。在各个年 龄段，仔鼠血铅水平随着饮水中铅浓度增加而递增。各铅暴露组 仔鼠血铅水平随日龄变化呈一致性规律，即第7天较高，第14 天有所下降，到刀 天则明显增加，28天又有所口落。其中，第 ZI天血铅与第7天、第14天比较均有显著差异（P＜0．05）。3，与对照组比较，0．05％组与0刀75％组NRZA亚单位mRNA的表达 水平在出生第 7天。14天时显著增强（P＜0．05），而 0．0250组仅 在第 7 天时，其 NRZA mRNA 的表达水平比对照组明显增强 o＜0刀引。4、三组铅暴露仔鼠在第7、14、21。28天时，NRZB mRNA的表达 水平与对照组比较均无显著差异，备铅暴露组之间两两比较也无 显著差异（P＞0刀5）。 3 结 论卜 低水平的铅暴露（饮水中含0．0250、0．05O、0．0750醋酸铅）即 可