目的:宫颈癌(cervical carcinoma)是女性最常见的一种恶性肿瘤，居第二位。化学药物治疗为中、晚期宫颈癌，转移、扩散或复发宫颈癌患者的姑息治疗方法，化疗药物在致肿瘤细胞死亡的同时对机体正常细胞产生不同程度的毒副作用,且长时间应用化疗药物后，常出现肿瘤细胞对化疗药物的耐药反应，最终导致化学药物治疗宫颈癌方法失败。如能寻找对肿瘤细胞具有强靶作用、且有一定疗效的新型制剂治疗宫颈癌，或利用它们增加现有化疗药物的化疗效果，改善目前的化疗状况就显得极其重要。本实验旨在研究茯苓多糖(Pachymaram)对人宫颈癌hela细胞株增殖的作用，及与紫杉醇联合用药对人宫颈癌hela细胞株体外生长的影响，以期在临床上改善药物治疗宫颈癌现状，为制定宫颈癌化疗方案提供新思路。　　方法:　　1．细胞培养：常规方法复苏冻存于液氮罐中的宫颈癌hela细胞，离心、洗涤后，制成单细胞悬液，接种于含10％小牛血清RPMI-1640培养液的培养瓶中，置于37℃,5%二氧化碳饱和湿度培养箱内培养，每天观察细胞生长情况，待细胞生长至80%融合时(约3-5天)，胰酶消化，制成单细胞悬液，以备实验用。　　2．染料排斥法测定：把制备成单个细胞的悬液用培养液稀释五倍，取9滴细胞悬液移入试管中，加1滴0.4%台盼蓝溶液，混匀，在3min内，用血球计数板计数活细胞数。　　3．流式细胞仪测定：取对数生长期细胞，既细胞生长达80%融合时，常规消化制成单细胞悬液，以1×105/ml密度接种于培养瓶中，24h后换液，加入药物或培养液培养24h，收集所有细胞，将约1×105个细胞移入离心管中，1000rpm离心8分钟，弃去上清后，连续两次，用PBS溶液清洗一次，在离心管中留约0.5mlPBS，经300目尼龙网过滤，加入70％冰乙醇5ml混匀固定，4℃放置48h以上，检测时，离心离去乙醇，沉淀物经PBS离心洗涤2次，在离心管中留1mlPBS，打散细胞团，以500目铜网过滤成单细胞悬液，浓度约为1*105个/ml。加入Rnase5ul(10mg/ml)，37℃放置1h，以消除RNA的干扰，离心，用冷PBS洗一次，加入PI（100ug/ml）染液，室温避光染色30分钟，计数1×104个细胞，流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期，测得的数据和图形输入 B.D公司提供的流式细胞分析软件，以低于G1期DNA含量的细胞为凋亡细胞，应用相应程序进行资料处理。　　结果:　　1、倒置像差显微镜观察：实验组细胞形态欠规则，伪足回缩，细胞质浓缩，细胞核核仁染色不均，细胞核核物质分散，细胞深染，凋亡小体出现。对照组细胞生长良，细胞透明，呈复层性生长，细胞呈梭形或多角形，易融合形成集落，细胞浆内颗粒较少，细胞核隐约可见。　　2、台盼蓝染料排斥法检测：显示茯苓多糖对宫颈癌hela细胞体外生长的增殖有抑制作用，经细胞计数后，描绘生长曲线图可知，经不同浓度茯苓多糖处理后的hela细胞较对照组生长缓慢，表现出明显的生长抑制，而对照组细胞生长良好，呈典型的生长曲线图。经台盼蓝染料染色后，在光镜下计数活细胞数，结果表明，与对照组比较活细胞数减少，统计学分析差异有显著性。茯苓多糖单独用药，浓度分别为（3mg/ml,6mg/ml,12mg/ml)对 hela细胞体外生长均具有抑制增殖作用，经不同浓度的茯苓多糖处理细胞后，与对照组相比，差异具有显著性，且随着茯苓多糖药物浓度的增大、茯苓多糖作用时间的延长，活细胞数随之下降。综上结果表明，茯苓多糖对 hela细胞的增殖抑制作用有明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系。茯苓多糖(3mg/ml)与紫杉醇(0.043mg/ml)联合用药作用 hela细胞后，与对照组或与单独应用紫杉醇组（0.043mg/ml）相比，活细胞数差异具有显著性，上述结果表明，茯苓多糖与紫杉醇联合用药对 hela细胞的增殖抑制作用具有协同作用。　　3、流式细胞仪检测hela细胞周期分布和凋亡显示：用药24小时后，随药物浓度增大，G2/M期比例逐渐增多，S期比例则逐渐减少，且出现典型的亚二倍体凋亡峰，凋亡百分率茯苓多糖组分别为1.9%、3.3%、10.3%;紫杉醇组为2.6%，联合用药组为9.2%。上述结果表明，茯苓多糖用药24小时后可阻滞hela细胞周期进程于G2/M期，茯苓多糖与紫杉醇联合用药组，24小时可阻滞hela细胞周期进程于G2/M期，比例较单独应用紫杉醇组增高。　　结论:　　1、本试验首次通过体外试验证实茯苓多糖单独应用对 hela细胞的体外生长有增殖抑制作用，增殖抑制作用呈剂量-效应和时间-效应依赖关系。　　2、本试验证实应用茯苓多糖可阻滞宫颈癌hela细胞周期于G2/M期，并可诱导宫颈癌细胞凋亡。　　3、对联合用药组与紫杉醇单独用药组的活细胞数进行统计学处理，两者有显著的差异性（P<0.05)，结果显示两药联合应用有协同作用，综上可知，茯苓多糖可增加肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性。