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少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans)是我国分布十分广泛的一种蜈蚣种类,对于少棘蜈蚣分泌的毒液也有了一定程度的研究。目前已经在少棘蜈蚣毒液中分离并鉴定出多种具有能够作用于细胞的电压门控离子通道活性的多肽类神经毒素。?-SLPTX-Ssm2a是一种少棘蜈蚣多肽毒素,200 nM该毒素就能够抑制45%的钾离子电流。通过搜索NCBI数据库,获得了一系列与?-SLPTX-Ssm2a具有高度同源性的毒素分子——?-SLPTX-Ssm2b、?-SLPTX-Ssm2c、?-SLPTX-Ssm2d以及?-SLPTX-Ssm2e。这四种毒素分子均含有31个氨基酸残基,其中包含六个半胱氨酸并形成了三对二硫键。通过密码子优化并采用全基因合成的方法获得了这四个毒素分子的DNA序列,并利用RF-cloning技术将其插入到表达载体中。其中将?-SLPTX-Ssm2b、?-SLPTX-Ssm2d插入到pET-His-SUMO表达载体中,将?-SLPTX-Ssm2c、?-SLPTX-Ssm2e插入到pET-GST-SUMO表达载体中。通过自动诱导表达的方法在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白。对于使用6?His标签融合表达的蛋白采用镍柱纯化,对于使用GST标签表达的融合蛋白采用GST亲和层析柱纯化。对于纯化后的融合蛋白经过超滤脱盐浓缩后使用Ulp1激酶切割掉SUMO标签释放出相应的毒素分子。经过反相液相色谱对毒素分子进一步纯化获得高纯度的毒素分子。通过MALDI-TOF质谱鉴定,表达出的?-SLPTX-Ssm2b、?-SLPTX-Ssm2c、?-SLPTX-Ssm2d和?-SLPTX-Ssm2e的鉴定分子量(其鉴定分子量分别为3390.4685 Da、3451.773 Da、3390.8113 Da和3475.732 Da)与其理论分子量(其理论分子量分别为3391.04 Da、3351.13 Da、3391.89 Da和3475.07 Da)一致。以上说明通过实验成功表达并纯化出了正确形成三对二硫键的蜈蚣毒素分子。实验证明该套表达纯化的方法对于表达富含二硫键的多肽毒素具有一定的普适性。下一步将检测这一系列多肽毒素分子的生理活性,为后续新型杀虫肽的筛选以及药物开发利用奠定基础。