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【目的】应用2D-PAGE结合MELDI-TOF-MS等蛋白质组学技术,对淋巴结转移和无转移两组乳腺癌病例的肿瘤组织蛋白表达谱进行检测和对比分析,并运用组织芯片对所筛选的部分差异蛋白进行免疫组织化学验证,以期寻找与乳腺癌淋巴结转移密切相关的蛋白标志物并为进一步研究奠定基础。【方法】选取有淋巴结转移和无淋巴结转移的乳腺癌新鲜标本各10例,其中两组病例间在患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、ER、PR、HER-2及Ki-67的表达等方面均无显著性差异(P>0.05)。提取组织蛋白进行双向凝胶电泳,用Image Master 2DPlatinum 5.0图像分析软件(GE Healthcare)对差异蛋白点进行比较分析,得到蛋白点的强度值,若强度比值>2.0说明蛋白点具有表达差异。运用MELDI-TOF-MS对所筛选的差异蛋白点做质谱鉴定。通过Profound查询软件搜索NCBInr数据库来鉴定蛋白质,其中以Mowse分值为基础的概率评价数据库搜寻结果的质量,分值大小表示鉴定蛋白属于随即匹配的可能性,匹配分值大于56表明具有显著性意义,蛋白质获得准确鉴定。应用组织芯片及免疫组织化学SP法检测72例乳腺癌组织中差异表达蛋白Stathmin和Ezrin。同时取10例乳腺良性病变(乳腺纤维腺瘤4例,乳腺增生症6例)组织做为对照。【结果】(1)质谱鉴定出214个位点,其中完全匹配28对,占33.7%;匹配点中只有一个点测序成功,相应点未能测序的共86个(转移组24个,无转移组62个),占51.8%;有12对匹配点经鉴定为不同蛋白,占14.5%。在排除胶原蛋白、血清白蛋白及电泳弥散等造成的相同蛋白后,共筛选出差异蛋白80个。80个差异蛋白中,已有文献报道与乳腺癌发生发展相关的45个,与其它肿瘤相关的21个,另有14个蛋白尚未见其与肿瘤相关的报道。(2)10例良性病变乳腺组织中Stathmin蛋白表达全部为阴性,乳腺癌组织中Stathmin阳性表达呈棕黄色颗粒弥漫分布于癌细胞的细胞浆,Stathmin蛋白在乳腺癌淋巴结转移组和无转移组阳性率分别为73.5%和47.4%,两组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。Stathmin蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、ER、PR、Ki-67等临床病理特征无明显相关性,但其与HER-2的表达具有相关性。(3)Ezrin在乳腺良性病变组织呈导管内缘细胞膜表达,无细胞质表达;而Ezrin在癌组织中表现为细胞质内弥散表达,呈广泛细胞膜着色。Ezrin在乳腺癌淋巴结转移组和无转移组阳性率分别为78.6%和46.9%,两组间表达差异有统计学意义(P<0.05),Ezrin蛋白表达与患者年龄、组织学分级、ER、PR、Ki-67和HER-2等临床病理特征无明显相关性,但与肿瘤大小具有相关性。【结论】(1)初步分析显示,淋巴结转移组和无转移组乳腺癌组织存在多种差异蛋白,提示乳腺癌的转移过程可能是多种蛋白共同作用的结果,这与基因组水平的研究结果一致。本实验所筛选的差异蛋白可能在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用,为进一步深入研究奠定了良好基础。(2)本实验所验证的Stathmin、Ezrin蛋白与乳腺癌淋巴结转移相关,通过对原发肿瘤相关蛋白的检测有可能对乳腺癌的转移能力做出预测。