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本试验对鹅催乳素受体基因(PRLR)部分序列进行了克隆和表达,分别获得一个606bp的片断和500 bp的片断,并且在鹅不同组织中进行表达,从而为研究禽类抱性分子机理提供理论依据。
性成熟后的洪泽湖鹅屠宰后取肾、肝、睾丸、输精管、卵巢、脾、大肠、心,提取总RNA,从总RNA中分离mRNA,(1)对PRLR基因编码区部分(EST)的克隆,克隆到了一个606 bp的鹅催乳素受体基因的片段,通过与鸡催乳素受体序列比对分析表明,此片段位于阅读框(open reading frame,ORF)内,含催乳素受体部分外显孚9(148 bp),外显子10(179 bp),外显子11(145 bp),外显于12(100 bp),部分外显子13(43 bp)。PRLR片段(EST)的同源扩增产物(606bp)与鸡催乳素受体基因序列分析,经过比较,发现两者蛋白质与氨基酸序列分别基本相同,说明本试验扩增的确实是鹅的基因序列,而不是其他动物的基因序列。(2)以5’RACE产物作为模板,采用5’RACE-PCR技术,我们得到了一个500 bp的片段,测序结果与鸡的序列比对表明,这一片段含239 bp的第1外显子,69 bp的第2外显子,114 bp的第3外显子及81 bp的第4外显子(部分),5’UTR区跨第l、2、3外显子及部分第4外显子。序列比对发现,外显子1与报道的鸡PRLR第1外显子无法配对;外显子2、3可以配对。同时根据扩增的EST与5’端序列分析中发现,编码区在进化上相对保守,而5’-UTR相对不保守。根据本试验已经克隆到鹅催乳素受体三个剪接体,已证明扩增的鹅的第1外显子为一个剪切体,与报道的鸡的第l外显子的来源不同。(3)应用RT-PCR的方法,我们还检测了鹅的PRLR在成体不同组织中的表达情况,表明PRLR在鹅各种组织中均有表达,即泛表达。说明PRLR、PRL中的功能的重要性,这与催乳素(PRL)在脊椎动物中有着广泛的生理功能报道相一致。