【摘 要】
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目的:1、建立老年COPD大鼠模型、老年大鼠髋部骨折模型,观察各组肺脏功能学及组织学变化。2、观察老年COPD大鼠、老年COPD髋部骨折大鼠自噬是否存在,比较不同时间点细胞自噬的
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目的:1、建立老年COPD大鼠模型、老年大鼠髋部骨折模型,观察各组肺脏功能学及组织学变化。2、观察老年COPD大鼠、老年COPD髋部骨折大鼠自噬是否存在,比较不同时间点细胞自噬的表达情况;观察老年COPD大鼠、老年COPD髋部骨折大鼠炎症水平。3、研究自噬抑制剂3-MA对老年COPD髋部骨折大鼠自噬相关蛋白LC3B表达的影响,同时评价3-MA对老年COPD髋部骨折大鼠肺炎症的影响。方法:1、15只老年雄性WISTAR大鼠,随机分为3组,老年COPD对照组5只、老年大鼠对照组5只、老年大鼠髋部骨折组5只。分组完毕后用熏烟法制作COPD模型和用自制打击器制作髋部骨折模型。观察老年COPD对照组、老年大鼠对照组肺脏生物学及组织学改变,观察老年大鼠髋部骨折组髋部影像学改变。2、30只老年雄性WISTAR大鼠,随机分为2组,老年COPD大鼠、老年COPD髋部骨折大鼠,分别于8h、12h、24h、3D、5D处死动物取材,用ELLASA观察肺脏炎症介质(TNFa、 IL6、IL10)表达情况;用RT-PCR法检测自噬相关基因LC3B的mRNA表达情况,根据PCR结果在LC3B表达高峰期用透射电镜观察细胞自噬,用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白LC3B的表达情况。3、55只老年雄性WISTAR大鼠,随机分为3组,老年COPD大鼠、老年COPD髋部骨折大鼠、老年COPD髋部骨折大鼠+3MA干预组,后两组分别伤后8h、12h、24h、3D、5D处死动物取材,用ELLASA观察各组肺脏炎症介质(TNFa、IL6、IL10)表达情况;用RT-PCR法检测自噬相关基因LC3B的mRNA表达情况,根据PCR结果在LC3B表达高峰期用透射电镜观察细胞自噬,用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白LC3B的表达情况。结果:1.和老年大鼠对照组相比,老年COPD大鼠组肺脏形态学改变明显,老年大鼠髋部骨折组影像学显示造模成功率为90%,解剖学评估结果与x线评估结果相同。2. RT-PCR法检测显示,自噬想关基因LC3B的mRNA表达COPD组较对照组明显升高,并且随着时间持续升高,在伤后24h时达到高峰,一直到伤后5D均有表达;透射电镜结果,在高峰期COPD组较对照组细胞内自噬体较多,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果同透射电镜结果一致。3、ELLSA结果,3MA能够显著降低老年COPD大鼠髋部骨折后的炎症水平,在我们观测的的五个时间点上,3-MA组较COPD组LC3B的mRNA表达有明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜结果和免疫组化结果与mRNA结果一致。结论:1、成功建立老鼠COPD和髋部骨折模型。2、老年COPD大鼠髋部骨折后可以检测到肺组织细胞自噬的表达、炎症水平较对照组明显升高。3、3-MA可以抑制肺组织内细胞自噬的表达,同时可以降低老年COPD大鼠髋部骨折后肺组织炎症水平。
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