体外构建的工程化骨髓间充质干细胞在体内心肌组织生存研究

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目的:1.探索骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)移植到聚乙交酯-聚己内酯共聚物(Poly(glycolic acid)/Poly(e-Caprolactone) Co-polymer, PGCL)支架上构建BMMSCs-PGCL补片的可行性。2.观察体外构建BMMSCs-PGCL补片在正常心肌组织和梗死后心肌组织生长情况。方法:雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠(体重250g-300g)的BMMSCs采用贴壁分离筛选法进行分离、培养,选取第三代进行体外4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)标记。制作BMMSCs悬液(2×106个/cm2)种植于PGCL上形成BMMSCs-PGCL补片。培养48小时,在电镜下观察;H&E染色后在光学显微镜下观察。选择雌性SD大鼠(体重250g-300g),结扎左冠状动脉前降支制作心肌梗死(Myocardial infarction, MI)模型。把BMMSCs-PGCL补片植入到正常心肌组织和梗死后心肌组织培养4周。4周后取上述组织通过组织病理学检查,了解BMMSCs在PGCL支架上存活情况。结果:1.原代培养结果通过上述方法培养的BMMSCs贴壁生长,形状为梭形,呈漩涡状排列。2.体外构建的BMMSCs-PGCL补片分别在光学显微镜和电镜下观察结果:BMMSCs在PGCL支架中呈三维生长,细胞与支架黏附良好。3. BMMSCs-PGCL补片植入正常心肌组织的观察结果:在激光共聚焦显微镜下,对比观察移植后1周和第5周切片显示:同第1周相比,第5周的心肌组织内出现DAPI标记的BMMSCs.4. BMMSCs-PGCL补片植入梗死后心肌组织观察结果:在激光共聚焦显微镜下:梗死区出现DAPI标记的BMMSCs。H&E染色图片所示:梗死区出现BMMSCs。结论:1. BMMSCs在PGCL支架上贴附生长,黏附良好。2. PGCL支架与心肌组织相容性好。3. BMMSCs-PGCL补片可用于心肌组织修复。
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