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烟草是重要的经济作物,土传病原真菌对烟草的危害越来越重。生产上缺乏多抗品种,农业措施不能有效防治病害,常规的化学防治易导致环境污染及烟叶农药残留,生物防治因对生态环境无破坏作用,且防效持久而受到重视。细菌是土壤中数量最多的一类微生物,拮抗细菌的研究一直是生物防治研究的热点之一。本研究在洛阳市宜阳县、洛宁县、嵩县和汝阳县,采集了烟草不同生育期与不同植烟年限的根际土壤样品共30份,采用稀释平板法分离并统计菌落数量,对峙培养法与牛津杯法测定纯菌落对烟草土传病原真菌的抑制效果,依据形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析鉴定拮抗菌株的种类,结果如下。(1)经稀释平板法测定,洛阳地区烟草根际土样中细菌菌落数平均数,宜阳县为5.273×107 cfu/g,嵩县为7.304×107 cfu/g,洛宁县为7.312×107 cfu/g,汝阳县为5.218×107 cfu/g。(2)经纯化培养,共获得180个细菌单菌落。采用平板对峙培养法初步测定,筛选出94株对烟草疫霉、瓜果腐霉、尖孢镰刀菌具有拮抗作用,其中对3种土传病原真菌均有拮抗作用的有10株,对烟草疫霉有拮抗作用的有79株,对瓜果腐霉有拮抗作用的有16株,对尖孢镰刀菌有拮抗作用的有69株。(3)用牛津杯法测定,G111、G12、G122、G51、G52、J71、J72、L31、O42、S331、S3312、S3341、S61、YJ71、YJ72、YJ73、Y1B2计17株的发酵液对烟草疫霉和尖孢镰刀菌至少一种有一定的拮抗作用。(4)采用结晶紫草酸铵染色法对筛选获得的17个纯菌株与实验室保存的MS621、MS622、TS1112、TS6114、TS681、TS682、TS683计7个纯菌株进行革兰氏染色反应,结果均为革兰氏阳性菌,且产生芽孢。(5)依据《常见细菌鉴定手册》测定24株细菌的厌氧性、耐盐性以及对不同碳源、柠檬酸盐、丙二酸盐的利用等反应特征,将菌株G111、G12、G122、G51、G52、J71、J72、L31、MS621、MS622、O42、S331、S3312、S3341、S61、TS1112、TS6114、YJ71、YJ72、YJ73、Y1B2鉴定为芽孢杆菌属细菌;TS681、TS682、TS683鉴定为类芽孢杆菌属细菌。(6)通过24株细菌16S r DRNA序列比对分析,结合其形态学与生理生化鉴定结果,将菌株G51、G52、J71、J72、L31、O42、S331、S3312、S3341、S61、TS1112、TS6114、YJ71、YJ72、YJ73、Y1B2鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);菌株G111、G12、G122、MS621、MS622鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);菌株TS681、TS682、TS683鉴定为多粘类芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)。本试验在形态学、生理生化与分子生物学水平上鉴定了洛阳烟田根际土壤中拮抗细菌的种类,测定了其对烟草土传病原真菌的室内拮抗效果,在洛阳烟区烟草根际土壤中首次发现了多粘类芽孢杆菌,可为进一步研究与利用细菌防控烟草病害提供重要参考。