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目的:本实验通过建立脑缺血后处理模型,采用免疫组化法、RT-PCR法等技术观察缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤诱导的细胞损伤的影响,并检测海马组织c-fos mRNA的表达,探讨缺血后处理对脑保护作用的机制,为支持临床应用提供基本理论支持。方法:取健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,体重大约250-300g,随机分为三组:1、假手术组(Sham组),n=8:仅麻醉后分别分离左右两侧颈总动脉;2、缺血再灌注组(I/R组,n=8):给予脑缺血30min,再灌注24h(I/R组,n=8);3、缺血后处理组(Post组,n=8):给予脑缺血30min,再灌注15s后即刻阻断大鼠双侧颈总动脉15s,然后再灌注15s后阻断,如此3个循环实现缺血后处理,再灌注24h。以上三组分别用10%水合氯醛0.3ml/100m腹腔注射麻醉。术后放笼饲养24h。采用颈动脉放血处死大鼠,在冰块上快速开颅取海马组织,左侧海马进行液氮速冻后放入-80℃冰箱保存以备c-fos mRNA的检测,使用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法;右侧海马放入4%的甲醛保存以备免疫组织化学法进行检测。结果:1、大鼠海马组织HE染色用来观察细胞形态及结构:Sham组神经细胞数量、形态结构正常,锥体细胞呈椭圆形分布,核仁清楚,病理学无明显改变;与sham组相比,I/R组的细胞元可见明显肿胀,并有明显的核固缩、核碎裂;与I/R组相比,post组细胞元肿胀减轻,核固缩、核碎裂的萎缩神经元减少;2、三组大鼠海马组织免疫组化染色观察c-fos mRNA表达情况:一般情况下,C-fos mRNA阳性细胞呈现棕黄色,主要分布在细胞核内;Sham组海马组织c-fos mRNA仅有少量表达,阳性细胞染色较浅;I/R大鼠海马组织c-fos染色较深,神经元结构清晰、完整,阳性物质存在于细胞核内;Post组大鼠海马组织c-fos有所表达,与Sham相比,染色有所减轻,阳性物质位于细胞核内。3、大鼠海马组织RT-PCRc-fos mRNA扩增表达情况:电泳图所对应Marker496bp水平的条带是c-fosmRNA,与marker水平的电泳条带对应的是β-action。Sham组的c-fos mRNA条带模糊、暗淡;I/R组的c-fos电泳条带明亮清晰;Post组与I/R组相比条带亮度有所减轻。三组β-action电泳条带的宽度和亮度差别不大,凝胶成像分析系统结果显示:I/R组的c-fos/β-action比值大于Sham组(p<0.05);Post组的c-fos/β-action比值大于I/R组(p<0.05)。结论:1、缺血再灌注可引起大鼠脑海马组织损伤;2、大鼠脑缺血再灌注可以诱导c-fos mRNA的表达增加;3、大鼠脑缺血后处理可以减轻c-fos mRNA的表达。