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目的:本研究运用阳离子化牛血清白蛋白(cationic bovine serum albumin,C-BSA)尾静脉注射的方法成功复制膜性肾病(membranous nephropathy,MN)大鼠模型,并给予降脂通络软胶囊、盐酸贝那普利进行干预,通过测定大鼠24小时尿蛋白定量、血生化指标,光镜、免疫荧光、电镜观测大鼠肾脏病理变化,免疫组化检测α-actinin-4、ZO-1蛋白及real-time PCR法检测α-actinin-4、ZO-1 m RNA在肾脏中的表达,来探讨降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护作用及对肾组织α-actinin-4、ZO-1表达的影响,从而为临床治疗膜性肾病提供理论依据。方法:选取健康SD大鼠60只,普通饲料喂养一周后,测定24小时尿蛋白定量均在正常范围内,随机分为正常组(ZG)10只,造模组50只。造模组预免疫1周后,尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白,每周三次,共四周。测定24小时尿蛋白定量,确定模型复制成功后,随机分为模型组(MG)、西药组(BG)、降脂通络低剂量组(JLG)、降脂通络中剂量组(JMG)、降脂通络高剂量组(JHG),每组各10只。西药组给予盐酸贝那普利(10mg/kg/d)研磨溶于3ml生理盐水灌胃,降脂通络低、中、高剂量组分别给予降脂通络软胶囊(25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d)溶于3ml生理盐水灌胃,模型组和正常组给予同等剂量的生理盐水灌胃。灌胃4周后,测定各组大鼠24小时尿蛋白定量(24-hour urinary total protein,UTP),腹主动脉取血,测定血总蛋白(serum total protein,TP)、血白蛋白(albumin,ALB)、血总胆固醇(total cholesterol,TC)、血甘油三酯(triglyceride,TG)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)等生化指标,留取新鲜肾脏组织,通过光镜、免疫荧光、电镜观测大鼠肾脏病理变化,免疫组化检测α-actinin-4、ZO-1蛋白及real-time PCR法检测α-actinin-4、ZO-1 m RNA在肾脏中的表达。结果:1一般情况正常组大鼠毛发光泽、精神良好、反应灵敏。模型复制成功后,各造模组大鼠出现毛发欠光泽、精神萎靡、反应迟钝、摄食减少等,甚至出现阴囊水肿、腹部肿胀。给药后,各治疗组大鼠较模型组情况好转,模型组未见明显改善。2各组大鼠24小时尿蛋白定量比较24小时尿蛋白定量,模型复制成功后,各造模组均较正常组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。灌胃4周后,各治疗组较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);降脂通络低剂量组与其他治疗组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);西药对照组、降脂通络中剂量组、降脂通络高剂量组比较,未见明显差异(P>0.05)。3各组大鼠血总蛋白、血白蛋白、血总胆固醇、血甘油三酯比较模型复制成功后,各造模组血总蛋白和血白蛋白均较正常组明显降低、血总胆固醇和血甘油三酯均较正常组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。灌胃4周后,各治疗组血总蛋白和血白蛋白较模型组显著升高、血总胆固醇和血甘油三酯较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);降脂通络低剂量组与其他治疗组比较,血总蛋白和血白蛋白明显降低、血总胆固醇和血甘油三酯明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);西药对照组、降脂通络中剂量组、降脂通络高剂量组两两比较,血总蛋白、血白蛋白、血总胆固醇、血甘油三酯均未见明显差异(P>0.05)。4各组大鼠血肌酐、血尿素氮比较各组大鼠之间血肌酐、血尿素氮相比无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。5各组大鼠肾脏病理变化正常组大鼠无明显的改变。模型组大鼠光镜下肾小球体积、毛细血管内皮细胞核均明显增大,肾小球基底膜呈弥漫性增厚,系膜基质增生;免疫荧光可见lg G和C3呈颗粒状沿着毛细血管袢及系膜区弥漫性沉积;电镜下肾小球基底膜不规则增厚,上皮下大量电子致密物沉积,足突广泛融合或消失,钉突形成。各治疗组与模型组比较,病理改变轻微,其中降脂通络低剂量组病理改变介于模型组与其他治疗组之间,其他治疗相比未见明显差异。6免疫组化检测α-actinin-4、ZO-1蛋白在肾脏的表达与分布α-actinin-4、ZO-1均主要表达于肾小球,沿毛细血管袢呈点线状分布,其中α-actinin-4在模型组较正常组表达增多,ZO-1模型组较正常组表达减少。各造模组与正常组相比,α-actinin-4的表达水平均增强、ZO-1的表达水平均减弱(P<0.05);各治疗组与模型组相比,α-actinin-4的表达水平均减弱、ZO-1的表达水平均增强(P<0.05);降脂通络低剂量组与其他治疗组比较,α-actinin-4的表达水平均增强、ZO-1的表达水平均减弱(P<0.05);西药对照组、降脂通络中剂量组、降脂通络高剂量组两两比较,α-actinin-4、ZO-1的表达水平未见明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。7 Real-time PCR法检测α-actinin-4、ZO-1 m RNA在肾脏的表达各造模组与正常组相比,α-actinin-4 m RNA的表达水平均有上调,ZO-1 m RNA的表达水平均下调,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组相比,α-actinin-4 m RNA的表达水平均有下调,ZO-1 m RNA的表达水平均上调,差异有统计学意义(P<0.05);降脂通络低剂量组与其他治疗组比较,α-actinin-4 m RNA的表达水平均有上调,ZO-1 m RNA的表达水平均下调,差异有统计学意义(P<0.05);西药对照组、降脂通络中剂量组、降脂通络高剂量组两两比较,α-actinin-4 m RNA、ZO-1 m RNA的表达水平未见明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1降脂通络软胶囊可明显升高膜性肾病大鼠的血总蛋白、血白蛋白水平,显著降低膜性肾病大鼠的24小时尿蛋白定量、血总胆固醇、血甘油三酯水平。2降脂通络软胶囊具有抑制膜性肾病大鼠肾小球基底膜免疫复合物沉积及基底膜增厚的作用,可减少足突融合等肾脏病理损伤。3降脂通络软胶囊可下调膜性肾病大鼠肾组织α-actinin-4蛋白和m RNA的表达水平,上调膜性肾病大鼠肾组织ZO-1蛋白和m RNA的表达水平,这可能与其维持足细胞的稳定性,延缓膜性肾病的进展有关。