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糖原合成酶激酶-3β(GSK-3p)是机体内广泛表达的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与调节机体内多个信号转导途径,其活性失调在中枢神经系统疾病的发病机制中起重要作用。GSK-3β激活能抑制转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的活性,损伤动物的学习记忆,但GSK-3p影响CREB活性的机制尚不明确。因此本实验对GSK-3p的下游信号通路Fyn/NMDA受体途径参与GSK-3β对CREB活性的调节进行了初步探讨。我们用渥曼青霉素(wortmannin)处理N2a细胞2小时或转染野生型糖原合成酶激酶-3β质粒(wtGSK-3p质粒),使GSK-3p活性升高,然后再加入Fyn的抑制剂PP2处理细胞1小时,通过免疫印迹及免疫共沉淀的方法检测GSK-3p活性、非受体酪氨酸激酶Fyn的活性及与Fyn/NMDA信号途径相关的N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)重要的调节亚基NR2B磷酸化水平(pNR2B). pNR2B与突触后致密区蛋白95(PSD95)复合物水平、蛋白激酶A(PKA)的活性和CREB活性的变化。结果表明：(1)与对照组相比2.5μM、5μM、10μM的PP2处理N2a细胞均使Fyn活性降至75%水平。(2)与对照组相比,2.5μM、5μM、10μM的wortmannin及转染wtGSK-3p质粒处理N2a细胞,均显著上调GSK-3p的活性(p<0.01)；并且GSK-3p激活不受PP2处理影响。(3)与对照组相比,wortmannin处理N2a细胞及转染wtGSK-3p质粒过度激活GSK-3p(p<0.01),上调Fyn活性(p<0.01),再加入2.5μM PP2处理1小时后,可使Fyn活性恢复到正常水平。(4)与对照组相比,过度激活GSK-3p上调NR2B磷酸化水平(p<0.001)及pNR2B-PSD95复合物比例(p<0.01),加入PP2处理1小时后,与wortmannin处理组或转染wtGSK-3p质粒组相比,NR2B磷酸化水平及pNR2B-PSD95复合物比例显著下降。(5)与对照组相比,过度激活GSK-3p下调PKA活性(p<0.05),加入PP2处理1小时后,与wortmannin处理组或转染wtGSK-3p质粒组相比,使PKA活性恢复到正常水平(p<0.05)。(6)与对照组相比,过度激活GSK-3p下调CREB活性位点Ser133位点磷酸化p<0.01),抑制CREB活性,而PP2处理,与wortmannin处理组或转染wtGSK-3p质粒组相比,使CREB在Ser133磷酸化水平恢复到正常(p<0.01)。以上结果表明GSK-3β过度激活上调Fyn活性,Fyn活性上调增加其底物NR2B磷酸化水平及pNR2B/PSD95比例进而影响PKA活性,降低CREB-Ser133磷酸化水平下调CREB活性。本研究探讨Fyn/NMDA受体途径参与GSK-3p对CREB活性的调控,补充了GSK-3p对CREB活性调控的机制,并为包括AD、PD在内的多种中枢神经系统疾病治疗提供相关理论依据。