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目的:探讨冠心病痰浊瘀阻证与凝血指标和心脏彩超之间的联系,挖掘可能提示该证微观辨证的新型参考指标,从miR-223-5p介导的巨噬细胞凋亡角度探讨冠心病痰浊瘀阻证可能存在的发病机制。材料与方法:比较凝血指标和心脏彩超在冠心病气虚血瘀证、气滞血瘀证与痰浊瘀阻证之间的差异及意义,探讨其与证型的联系。基于miRNA-seq手段比较冠心病气虚血瘀证、痰浊瘀阻证患者和正常人血清外泌体miRNAs分布差异,筛选出有意义的miRNA(即miR-223-5p)。验证冠心病痰浊瘀阻证患者血清外泌体miR-223-5p的表达情况,并检测单个核细胞中其下游靶基因的表达水平。提取冠心病痰浊瘀阻证患者血清外泌体并进行鉴定及定量;体外培养人单核细胞株THP-1细胞,应用PMA(100ng/μl)诱导为巨噬细胞;应用荧光探针标记外泌体,采用活细胞成像技术观察巨噬细胞对患者血清外泌体的摄取情况;并应用实时定量RT-PCR技术检测巨噬细胞在ox-LDL(50μg/ml)环境下摄取患者血清外泌体后,miR-223-5p下游靶基因ALDH2及凋亡基因caspase-3和bcl-2的表达水平,并与正常对照组进行比较分析。结果:1.凝血指标统计结果显示:PT%在冠心病气虚血瘀组、气滞血瘀组与痰浊瘀阻组间存在显著差异(p<0.05),其中痰浊瘀阻组显著高于气虚血瘀组(p<0.01)和气滞血瘀组(p<0.05),其余检测指标虽存在差异,但不具有统计学意义(p>0.05)。各凝血指标趋势如下:PT、TT与INR值痰浊瘀阻组<气滞血瘀组<气虚血瘀组;APTT与D-Di值气滞血瘀组<痰浊瘀阻组<气虚血瘀组;FBG值气滞血瘀组<气虚血瘀组<痰浊瘀阻组;PT%值气虚血瘀组<气滞血瘀组<痰浊瘀阻组。2.心脏彩超结果显示:LA在冠心病气虚血瘀证、气滞血瘀证与痰浊瘀阻证之间存在显著差异(p<0.05),组间比较气虚血瘀组显著高于气滞血瘀组(p<0.05),其他指标在各组间存在差异但不具有统计学意义(p>0.05)。3.外泌体miRNAs测序结果显示:miR-6503-3p、miR-6763-5p、miR-33a-5p、miR-223-5p、miR-3928-3p和miR-605-3p在痰浊瘀阻组同时高表达于气虚血瘀组和正常组,其中miR-223-5p与冠心病关系密切,主要通过血管发育、细胞对有机氮化合物的反应、对生长因子的反应、心脏发育等生物学过程和胆固醇代谢、流体剪切应力与动脉粥样硬化、Fox O信号通路、HIF-1信号通路、脂肪细胞因子信号通路等信号通路参与调节冠心病。4.外泌体miRNAs及单个核细胞m RNAs PCR检测结果显示:与正常人相比,痰浊瘀阻证患者miR-223-5p和caspase-3水平显著升高(p<0.05),bcl-2水平显著降低(p<0.05)。5.巨噬细胞与痰浊瘀阻证患者血清外泌体共同孵育后发现,细胞摄取了PKH67标记的外泌体;与Control组相比,ox-LDL组、Exo组和ox-LDL+Exo组细胞ALDH2和caspase-3表达量上升(p<0.01),bcl-2表达量下降(p<0.01)。ox-LDL+Exo+miR-223 inhibitor组与ox-LDL组相比ALDH2和caspase-3表达量下降,bcl-2表达量上升(p<0.01)。结论:1.凝血指标和心脏彩超在不同中医证型冠心病患者间存在差异,PT%与LA两个指标联合检测可以做为鉴别冠心病不同中医证型的参考依据。2.血清外泌miRNAs在不同证型冠心病患者和正常人间存在分布差异,可作为冠心病痰浊瘀阻证微观辨证的参考指标。3.miR-223-5p高表达于冠心病痰浊瘀阻证患者血清外泌体中,可通过下调ALDH2的表达,诱导巨噬细胞凋亡。